本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)生物，具體涉及一種卵巢癌類器官的改良構(gòu)建方法及其在天然產(chǎn)物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
1、卵巢癌是女性常見的疾病之一，在女性癌癥中的死亡人數(shù)位列第五，高于女性生殖系統(tǒng)的其他癌癥類型，五年生存率不到50％。目前卵巢癌的一線治療方案仍然是腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)和術(shù)后的鉑類和紫杉醇組合的輔助化療，雖然化療能一定程度改善卵巢癌的預(yù)后，但晚期卵巢癌患者的五年生存率仍然不到30％，在初始治療結(jié)束后超過70％的晚期卵巢癌患者出現(xiàn)復(fù)發(fā)和鉑類耐藥，高復(fù)發(fā)率以及化療耐藥是卵巢癌患者死亡的主要原因。近年來，雖然針對腫瘤的新藥層出不窮，但僅有20％最終進入臨床，且耗資巨大，準(zhǔn)確模擬體內(nèi)卵巢癌生物學(xué)特征的臨床前模型是必不可少的。
2、當(dāng)前腫瘤的臨床前體外研究大多依賴傳統(tǒng)的二維平面培養(yǎng)體系。然而，由于這種培養(yǎng)條件與體內(nèi)環(huán)境存在顯著差異，導(dǎo)致培養(yǎng)的細(xì)胞或組織失去原有的腫瘤形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能，同時也喪失了腫瘤的異質(zhì)性。類器官是通過體外三維干細(xì)胞培養(yǎng)創(chuàng)建的具有特定空間組織的組織類似物，能夠在體外模擬或再現(xiàn)一系列體內(nèi)的生理病理過程，具有相對穩(wěn)定的表型及遺傳學(xué)特征。在精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)應(yīng)用中，腫瘤患者衍生的腫瘤類器官被證明為有價值的診斷工具。卵巢腫瘤類器官培養(yǎng)體系中，在添加體內(nèi)微環(huán)境的各類生長因子和基質(zhì)成分后，可以形成接近體內(nèi)腫瘤微環(huán)境的培養(yǎng)系統(tǒng)。來源于卵巢癌患者個體組織的細(xì)胞形成患者來源卵巢癌類器官，與患者自體腫瘤相比，具有相似的組織學(xué)和基因組學(xué)特征。
3、天然產(chǎn)物因其結(jié)構(gòu)多樣性和生物活性，作為抗癌藥物研發(fā)的重要來源，在人類對抗癌癥的歷程中始終占據(jù)特殊地位。從紫杉醇、長春新堿到青蒿素衍生物，天然活性成分不斷刷新著腫瘤治療的認(rèn)知邊界。然而，傳統(tǒng)的體外細(xì)胞實驗往往無法準(zhǔn)確評估其在復(fù)雜腫瘤微環(huán)境中的作用，而動物模型在種屬差異和倫理問題上也存在挑戰(zhàn)。因此，在卵巢癌類器官(ovarian?cancer?organoid，oco)模型中評價天然產(chǎn)物的藥效，能夠更準(zhǔn)確地篩選出具有臨床轉(zhuǎn)化潛力的候選化合物，提高藥物研發(fā)的成功率。這一策略不僅有助于深入解析天然產(chǎn)物的作用機制，還能推動個性化治療的發(fā)展，為卵巢癌患者提供更有效的治療方案。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的目的是提供一種卵巢癌類器官的改良構(gòu)建方法及其在天然產(chǎn)物中的應(yīng)用，通過優(yōu)化卵巢癌類器官的培養(yǎng)，提高類器官培養(yǎng)的成功率和傳代能力，縮短建模周期，能夠模擬腫瘤狀態(tài)在體外進行天然產(chǎn)物藥物篩選。
2、本發(fā)明解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下：提供了卵巢癌類器官在制備抗腫瘤天然產(chǎn)物中的應(yīng)用。
3、進一步，天然產(chǎn)物為扁蒴藤素(pristmerin)。
4、同時，本發(fā)明還提供了一種卵巢癌類器官的改良構(gòu)建方法，包括以下步驟：
5、將無菌清洗后的卵巢癌組織剪碎至乳狀，消化后過篩收集濾液，重復(fù)2-5次，然后加入卵巢癌類器官培養(yǎng)基培養(yǎng)，選擇生長穩(wěn)定的卵巢癌類器官篩選天然產(chǎn)物，加入天然產(chǎn)物培養(yǎng)，檢測細(xì)胞活力，得卵巢癌靶向天然產(chǎn)物。
6、進一步，置于1mg/ml的膠原酶iv中消化10min后過100μm細(xì)胞篩收集濾液。
7、進一步，卵巢癌類器官培養(yǎng)基包括以下組分：重組人r-spondin-1蛋白500-1000ng/ml、重組人noggin蛋白1-100ng/ml、重組人fgf10蛋白1-20ng/ml、重組人egf蛋白1-10ng/ml、重組人heregulinβ-1蛋白1-50ng/ml、煙酰胺1-15μm，毛喉素10-20μm、氫化可的松1-500ng/ml、雌二醇50-100nm，y27632?1-5μm，n-乙酰半胱氨酸1-1.25mm，b27?1×，a83-010.1-0.5μm，glutamax補充劑1×，hepes緩沖液1×，primocin?0.2％-0.4％。
8、進一步，加入天然產(chǎn)物混勻后，滴入預(yù)熱的48孔板中每孔20μl，于37℃培養(yǎng)箱中放置20min使其凝固，每孔加入250μl的卵巢癌類器官培養(yǎng)基，于37℃，5％二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
9、進一步，采用calcein/pi檢測試劑檢測細(xì)胞活力。
10、進一步，卵巢癌靶向天然產(chǎn)物為扁蒴藤素。
11、本發(fā)明具有以下有益效果：
12、1、本發(fā)明提供了卵巢癌類器官的優(yōu)化培養(yǎng)方法，成功率更高，并將卵巢癌類器官用于天然產(chǎn)物篩選，利用具有腫瘤微環(huán)境，模擬體內(nèi)腫瘤狀態(tài)用于高通量藥物的篩選。
13、2、該培養(yǎng)方法提高類器官培養(yǎng)的成功率和傳代能力，縮短建模周期，能夠模擬腫瘤狀態(tài)在體外進行天然產(chǎn)物藥物篩選，使得天然產(chǎn)物的抗腫瘤活性評價更具臨床相關(guān)性，有助于篩選針對不同分子亞型的候選化合物。其次，類器官能夠維持腫瘤微環(huán)境中的關(guān)鍵細(xì)胞間相互作用，包括腫瘤細(xì)胞與基質(zhì)細(xì)胞的共存狀態(tài)，從而更準(zhǔn)確地評估天然產(chǎn)物對腫瘤微環(huán)境的影響。此外，與傳統(tǒng)二維細(xì)胞培養(yǎng)相比，類器官對藥物反應(yīng)的模擬更接近體內(nèi)情況，可更精確地預(yù)測天然產(chǎn)物的抗癌活性及耐藥性情況。同時，相較于動物模型，類器官培養(yǎng)具有更高的可重復(fù)性和可擴展性，減少了種屬差異帶來的干擾，并符合倫理要求。因此，卵巢癌類器官在天然產(chǎn)物的藥效評價中不僅提高了篩選效率，還為個性化治療提供了更可靠的研究平臺。
1.卵巢癌類器官在制備抗腫瘤天然產(chǎn)物中的應(yīng)用。
2.權(quán)利要求1中所述的卵巢癌類器官的改良構(gòu)建方法，其特征在于，包括以下步驟：
3.如權(quán)利要求2所述的卵巢癌類器官的改良構(gòu)建方法，其特征在于，置于1mg/ml的膠原酶iv中消化10min后過100μm細(xì)胞篩收集濾液。
4.如權(quán)利要求2所述的卵巢癌類器官的改良構(gòu)建方法，其特征在于，所述卵巢癌類器官培養(yǎng)基包括以下組分：重組人r-spondin?1蛋白500-1000ng/ml、重組人noggin蛋白1-100ng/ml、重組人fgf10蛋白1-20ng/ml、重組人egf蛋白1-10ng/ml、重組人heregulinβ1蛋白1-50ng/ml、煙酰胺1-15μm，毛喉素10-20μm、氫化可的松1-500ng/ml、雌二醇50-100nm，y276321-5μm，n-乙酰半胱氨酸1-1.25mm，b27?1×，a83-01?0.1-0.5μm，glutamax補充劑1×，hepes緩沖液1×，primocin?0.2％-0.4％。
5.如權(quán)利要求2所述的卵巢癌類器官的改良構(gòu)建方法，其特征在于，加入天然產(chǎn)物混勻后，滴入預(yù)熱的48孔板中每孔20μl，于37℃培養(yǎng)箱中放置20min使其凝固，每孔加入250μl的卵巢癌類器官培養(yǎng)基，于37℃，5％二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
6.如權(quán)利要求2所述的卵巢癌類器官的改良構(gòu)建方法，其特征在于，采用calcein/pi檢測試劑檢測細(xì)胞活力。
7.如權(quán)利要求2所述的卵巢癌類器官的改良構(gòu)建方法，其特征在于，所述卵巢癌靶向天然產(chǎn)物為扁蒴藤素。