本發(fā)明涉及過氧亞硝基離子檢測(cè)，尤其是涉及一種用于檢測(cè)onoo-的近紅外熒光探針及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
1、過氧亞硝基離子(onoo-)作為一種重要的活性氧氮物種，在生物體內(nèi)的生理和病理過程中起著關(guān)鍵作用，其異常水平與多種疾病，如炎癥、神經(jīng)退行性疾病、心血管疾病等密切相關(guān)。因此，開發(fā)一種能夠裸眼識(shí)別、快速靈敏且高選擇性檢測(cè)生物體內(nèi)過氧亞硝基離子的方法具有重要的科學(xué)意義和臨床應(yīng)用價(jià)值。
2、近紅外熒光探針由于具有組織穿透深度大、背景干擾低、對(duì)生物樣品損傷小等優(yōu)點(diǎn)，在生物成像和生物檢測(cè)領(lǐng)域受到了廣泛關(guān)注。然而，目前現(xiàn)有的過氧亞硝基離子熒光探針在檢測(cè)速度、靈敏度、選擇性以及生物相容性等方面仍存在一定的局限性，難以滿足實(shí)際應(yīng)用的需求。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本發(fā)明的目的是提供一種用于檢測(cè)onoo-的近紅外熒光探針及其制備方法和應(yīng)用，以提供一種檢測(cè)速度快、特異性強(qiáng)、靈敏度高、生物相容性好、結(jié)果可裸眼觀測(cè)的onoo-檢測(cè)探針。
2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種用于檢測(cè)onoo-的近紅外熒光探針，所述近紅外熒光探針的結(jié)構(gòu)式為：
3、
4、一種如上所述的用于檢測(cè)onoo-的近紅外熒光探針的制備方法，包括如下步驟：
5、s1、合成化合物1，將異佛爾酮、丙二腈溶于無(wú)水乙醇中，然后加入哌啶，于保護(hù)氣氛下進(jìn)行加熱回流反應(yīng)，反應(yīng)完畢后旋干得化合物1粗產(chǎn)物，將化合物1粗產(chǎn)物純化即得化合物1；
6、s2、合成化合物2，將s1獲得的化合物1、4-羥基苯甲醛用無(wú)水乙醇溶解后，加入哌啶于保護(hù)氣氛下進(jìn)行回流反應(yīng)，反應(yīng)完畢后旋干得化合物2粗產(chǎn)物，將化合物2粗產(chǎn)物純化即得化合物2；
7、s3、合成用于檢測(cè)onoo-的近紅外熒光探針，將化合物2溶于dcm中，于冰浴條件下滴加三乙胺，攪拌20min后滴加4-(三氟甲基)苯甲酰氯，于25℃、保護(hù)氣氛圍下攪拌過夜，萃取有機(jī)層，純化即可；
8、反應(yīng)式如下：
9、
10、優(yōu)選地，s1中異佛爾酮：丙二腈：無(wú)水乙醇：哌啶的當(dāng)量比為1:2:10:0.01；加熱回流為85℃、0.1mpa條件下回流12h。
11、優(yōu)選地，s1中旋干采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行減壓旋干，減壓條件為0.01mpa；化合物1粗產(chǎn)物的純化采用硅膠柱層析，洗脫劑為石油醚。
12、優(yōu)選地，s2中化合物1：4-羥基苯甲醛：無(wú)水乙醇：哌啶的當(dāng)量比為1:1.5:10:0.01；回流于90℃、0.1mpa條件下回流4h。
13、優(yōu)選地，s2中旋干采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行減壓旋干，減壓條件為0.01mpa；化合物2粗產(chǎn)物純化采用硅膠柱層析，洗脫劑為石油醚：乙酸乙酯按體積比為6:1混合的混合溶劑。
14、優(yōu)選地，s3中化合物2：dcm：三乙胺：4-(三氟甲基)苯甲酰氯的當(dāng)量比為1:5:1.2:2。
15、優(yōu)選地，s3中攪拌于0.1mpa下進(jìn)行；萃取采用乙酸乙酯萃??；純化采用硅膠柱純化，洗脫劑為石油醚：乙酸乙酯按體積比為10:1混合的混合溶劑。
16、一種利用上述用于檢測(cè)onoo-的近紅外熒光探針檢測(cè)過氧亞硝基離子的方法，將用于檢測(cè)onoo-的近紅外熒光探針加入待檢測(cè)生物樣品中，孵育后利用熒光檢測(cè)儀器檢測(cè)熒光信號(hào)變化，即可實(shí)現(xiàn)過氧亞硝基離子的定性和定量分析。
17、一種上所述的用于檢測(cè)onoo-的近紅外熒光探針在過氧亞硝基離子檢測(cè)中的應(yīng)用。
18、因此，本發(fā)明提供的一種用于檢測(cè)onoo-的近紅外熒光探針及其制備方法和應(yīng)用，其具體技術(shù)效果如下：
19、(1)本發(fā)明提供的用于檢測(cè)onoo-的近紅外熒光探針，檢測(cè)速度快，響應(yīng)onoo-快速，在60秒內(nèi)即可達(dá)到最高熒光強(qiáng)度，可以實(shí)現(xiàn)生物體內(nèi)快速變化的過氧亞硝基離子水平的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)需求；
20、(2)本發(fā)明提供的用于檢測(cè)onoo-的近紅外熒光探針，反應(yīng)顯著易觀察，當(dāng)與onoo-發(fā)生反應(yīng)后，可以產(chǎn)生強(qiáng)烈的紅色熒光，裸眼即可觀察到溶液顏色的變化；
21、(3)本發(fā)明提供的用于檢測(cè)onoo-的近紅外熒光探針，選擇性強(qiáng)、靈敏度高，可以有效避免其他生物分子和活性物質(zhì)的干擾，確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，最低檢出限可達(dá)107nm；
22、(4)本發(fā)明提供的用于檢測(cè)onoo-的近紅外熒光探針，具有良好的生物相容性，在生物體內(nèi)的毒性較低，不會(huì)對(duì)生物樣品的正常生理功能產(chǎn)生不利影響，為其在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)；
23、(5)本發(fā)明提供的用于檢測(cè)onoo-的近紅外熒光探針制備方法，簡(jiǎn)單易操作，原料成本低廉且易得，合成效率高，可以用于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)，具有廣闊的應(yīng)用前景。
24、下面通過附圖和實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步的詳細(xì)描述。
1.一種用于檢測(cè)onoo-的近紅外熒光探針，其特征在于，所述近紅外熒光探針的結(jié)構(gòu)式為：
2.一種如權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)onoo-的近紅外熒光探針的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種用于檢測(cè)onoo-的近紅外熒光探針的制備方法，其特征在于：s1中異佛爾酮：丙二腈：無(wú)水乙醇：哌啶的當(dāng)量比為1:2:10:0.01；加熱回流為85℃、0.1mpa條件下回流12h。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種用于檢測(cè)onoo-的近紅外熒光探針的制備方法，其特征在于：s1中旋干采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行減壓旋干，減壓條件為0.01mpa；化合物1粗產(chǎn)物的純化采用硅膠柱層析，洗脫劑為石油醚。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種用于檢測(cè)onoo-的近紅外熒光探針的制備方法，其特征在于：s2中化合物1：4-羥基苯甲醛：無(wú)水乙醇：哌啶的當(dāng)量比為1:1.5:10:0.3；回流于90℃、0.1mpa條件下回流4h。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種用于檢測(cè)onoo-的近紅外熒光探針的制備方法，其特征在于：s2中旋干采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行減壓旋干，減壓條件為0.01mpa；化合物2粗產(chǎn)物純化采用硅膠柱層析，洗脫劑為石油醚：乙酸乙酯按體積比為6:1混合的混合溶劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種用于檢測(cè)onoo-的近紅外熒光探針的制備方法，其特征在于：s3中化合物2：dcm：三乙胺：4-(三氟甲基)苯甲酰氯的當(dāng)量比為1:5:1.2:2。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種用于檢測(cè)onoo-的近紅外熒光探針的制備方法，其特征在于：s3中攪拌于0.1mpa下進(jìn)行；萃取采用乙酸乙酯萃?。患兓捎霉枘z柱純化，洗脫劑為石油醚：乙酸乙酯按體積比為10:1混合的混合溶劑。
9.一種利用權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)onoo-的近紅外熒光探針檢測(cè)過氧亞硝基離子的方法，其特征在于：將用于檢測(cè)onoo-的近紅外熒光探針加入待檢測(cè)生物樣品中，孵育后利用熒光檢測(cè)儀器檢測(cè)熒光信號(hào)變化，即可實(shí)現(xiàn)過氧亞硝基離子的定性和定量分析。
10.一種如權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)onoo-的近紅外熒光探針在過氧亞硝基離子檢測(cè)中的應(yīng)用。