本發(fā)明屬于腫瘤分子生物學(xué)，具體涉及抑制或檢測(cè)外泌體mir-3150a-5p表達(dá)試劑的應(yīng)用以及鼻咽癌轉(zhuǎn)移治療藥物和預(yù)后制劑。

背景技術(shù)：

1、鼻咽癌（nasopharyngeal?carcinoma，npc）發(fā)生于鼻咽粘膜上皮，是頭頸部最為常見(jiàn)的惡性腫瘤。npc?的發(fā)病因素涉及遺傳、環(huán)境和生活方式等多方面，包括eb?病毒感染、吸煙、飲酒、遺傳因素、飲食習(xí)慣以及某些化學(xué)物質(zhì)和放射線等。

2、世界衛(wèi)生組織將npc?定義為三種類型：角化性、非角化性鱗狀細(xì)胞癌和未分化或低分化癌。其中，非角化亞型鼻咽癌占流行地區(qū)腫瘤的95%以上。由于病變?cè)缙诎Y狀不明顯，且npc?具有高度侵襲性和高轉(zhuǎn)移潛能，70%以上的患者初診即發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，約20-30%的患者發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，主要包括肺、肝、骨等。盡管放療聯(lián)合化療能有效地控制局部病灶、降低死亡率以及提高5?年總生存率，但發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者的治療效果仍然不理想，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移仍是目前臨床治療失敗的主要原因。

3、外泌體是幾乎所有哺乳動(dòng)物細(xì)胞都會(huì)分泌的杯狀雙層膜小囊泡，在血液等體液內(nèi)傳播，可以通過(guò)直接與細(xì)胞外基質(zhì)相互作用，直接被釋放到生物體液中，將內(nèi)容物傳遞至受體細(xì)胞中影響其生物功能。腫瘤外泌體攜帶來(lái)源于腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)信息（蛋白、dna和microrna等），其內(nèi)容物的濃度與腫瘤細(xì)胞的侵襲能力及腫瘤微環(huán)境相關(guān)，通過(guò)分析外泌體的表面標(biāo)記或內(nèi)部成分可以直接獲得細(xì)胞的基本信息。由于外泌體有脂質(zhì)膜保護(hù)，其內(nèi)容物不易被降解破壞,使得無(wú)論新鮮的還是長(zhǎng)期保存的樣本皆可用于分析。mirna存在于外泌體內(nèi)容物中，可以通過(guò)外泌體的包裹從腫瘤細(xì)胞釋放到體液中，不會(huì)受到核糖體酶的降解。更重要的是，外泌體可以從眾多體液中獲得(血液、尿液等)，這使得外泌體檢測(cè)在腫瘤診療中極具前途，成為一種較為理想的“液體活檢”方法。

4、因此，迫切需要開(kāi)發(fā)新的可靠的非侵入性早期轉(zhuǎn)移診斷預(yù)后標(biāo)記物，促進(jìn)鼻咽癌的早期精準(zhǔn)干預(yù)和治療，延長(zhǎng)鼻咽癌患者的生存期。專利申請(qǐng)cn118086492a公開(kāi)了mir-376a-5p在鼻咽癌患者血液中的表達(dá)水平顯著高于健康人群，可作為鼻咽癌診斷的mi?rna標(biāo)志物以及治療靶標(biāo)。本發(fā)明不僅僅是開(kāi)發(fā)了一種新的鼻咽癌診斷預(yù)后標(biāo)記物mir-3150a-5p，且來(lái)源為外泌體，不同于該專利申請(qǐng)的血液來(lái)源的標(biāo)記物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)所存在的問(wèn)題，本發(fā)明提供了抑制或檢測(cè)外泌體mir-3150a-5p表達(dá)試劑的應(yīng)用以及鼻咽癌轉(zhuǎn)移治療藥物和預(yù)后制劑。本發(fā)明是通過(guò)外泌體mir-3150a-5p作為預(yù)測(cè)鼻咽癌轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)的標(biāo)志物，通過(guò)分析其表達(dá)量即可快速實(shí)現(xiàn)鼻咽癌的輔助預(yù)后檢測(cè)。且mir-3150a-5p可作為治療靶點(diǎn)，靶向抑制其表達(dá)可實(shí)現(xiàn)鼻咽癌患者的治療，具有較廣的應(yīng)用前景。

2、本發(fā)明所述mir-3150a-5p的核苷酸序列為caaccucgacgaucuccucagc。

3、本發(fā)明的目的之一是提供抑制外泌體mir-3150a-5p表達(dá)試劑的應(yīng)用，用于制備鼻咽癌治療藥物。

4、進(jìn)一步地，

5、所述的抑制外泌體mir-3150a-5p表達(dá)試劑包括mir-3150a-5p?inhibitior。

6、更進(jìn)一步地，

7、mir-3150a-5p?inhibitior序列為gcugaggagaucgucgagguug。

8、本發(fā)明的目的之二是提供一種鼻咽癌轉(zhuǎn)移治療藥物，包括抑制外泌體mir-3150a-5p表達(dá)的試劑。

9、進(jìn)一步地，

10、所述的抑制外泌體mir-3150a-5p表達(dá)試劑包括mir-3150a-5p?inhibitior。

11、更進(jìn)一步地，

12、mir-3150a-5p?inhibitior序列為gcugaggagaucgucgagguug。

13、本發(fā)明的目的之三是提供檢測(cè)外泌體mir-3150a-5p表達(dá)試劑的應(yīng)用，用于制備鼻咽癌轉(zhuǎn)移預(yù)后制劑。通過(guò)檢測(cè)外泌體mir-3150a-5p在鼻咽癌患者中的表達(dá)水平以輔助診斷和/或評(píng)估鼻咽癌早期轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)。

14、進(jìn)一步地，

15、所述的檢測(cè)外泌體mir-3150a-5p表達(dá)的試劑，包括pcr檢測(cè)試劑。

16、更進(jìn)一步地，

17、所述的pcr檢測(cè)試劑中的擴(kuò)增引物序列：上游引物為ccaacctcgacgatctcctcagc，下游引物為cagtctcagggtccgaggtattc。

18、優(yōu)選地，所述檢測(cè)樣本為血清外泌體。

19、本發(fā)明的目的之四是提供一種鼻咽癌轉(zhuǎn)移預(yù)后制劑，包括檢測(cè)外泌體mir-3150a-5p表達(dá)試劑。

20、所述的檢測(cè)外泌體mir-3150a-5p表達(dá)試劑包括pcr檢測(cè)試劑。

21、更進(jìn)一步地，

22、所述的pcr檢測(cè)試劑中的擴(kuò)增引物序列：上游引物為ccaacctcgacgatctcctcagc，下游引物為cagtctcagggtccgaggtattc。

23、優(yōu)選地，所述檢測(cè)樣本為血清外泌體。

24、本發(fā)明通過(guò)臨床血清外泌體mirna測(cè)序和tcga數(shù)據(jù)庫(kù)分析，發(fā)現(xiàn)mir-3150a-5p在鼻咽癌轉(zhuǎn)移患者中的表達(dá)顯著高于未轉(zhuǎn)移患者，其可以作為預(yù)測(cè)鼻咽癌轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)和不良預(yù)后的可靠標(biāo)志物。

25、本發(fā)明通過(guò)特異性擴(kuò)增mir-3150a-5p的試劑盒和血清樣本檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)鼻咽癌早期轉(zhuǎn)移的快速輔助診斷，且經(jīng)計(jì)算分析auc曲線下面積達(dá)0.84，靈敏度78%，特異度83%。

26、本發(fā)明設(shè)計(jì)了基于mir-3150a-5p的抑制劑序列（gcugaggagaucgucgagguug），發(fā)現(xiàn)靶向敲低該mirna能夠顯著抑制鼻咽癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力，表明其具有開(kāi)發(fā)為治療鼻咽癌藥物的潛力。

27、檢測(cè)血清外泌體中mir-3150a-5p表達(dá)水平，用于鼻咽癌轉(zhuǎn)移的輔助診斷和風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)?；谠搈irna的引物設(shè)計(jì)、試劑盒開(kāi)發(fā)及其在臨床診斷中的具體應(yīng)用。通過(guò)mir-3150a-5p的特異性抑制劑序列，抑制其表達(dá)以治療鼻咽癌。包含使用mirna?inhibitor或其他載體（如核酸藥物、生物活性片段）的藥物開(kāi)發(fā)和治療應(yīng)用。

28、本發(fā)明可能的變更設(shè)計(jì)方向或者變形方案：

29、(一)多mirna聯(lián)合檢測(cè)

30、可能會(huì)以mir-3150a-5p與其他mirna的組合（如多標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)）取代單一mirna的診斷功能，以提升靈敏度和特異度。

31、(二)樣本來(lái)源改進(jìn)

32、本發(fā)明基于血清外泌體樣本檢測(cè)，可能的變形包括利用其他生物樣本如唾液、尿液、組織活檢、血漿作為檢測(cè)來(lái)源，以實(shí)現(xiàn)非侵入式或多樣化的診斷方案。

33、(三)替代抑制劑設(shè)計(jì)

34、本發(fā)明利用mir-3150a-5p?inhibitor序列抑制該mirna，還可能設(shè)計(jì)小分子化合物、反義寡核苷酸（aso）、sirna等其他形式的mirna抑制劑。

35、本發(fā)明有益效果

36、本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)如下：本發(fā)明發(fā)現(xiàn)mir-3150a-5p在鼻咽癌轉(zhuǎn)移患者血清外泌體中的表達(dá)水平顯著高于未轉(zhuǎn)移患者，且經(jīng)計(jì)算分析auc曲線下面積為0.84，mir-3150a-5p的診斷靈敏度可達(dá)到78％，特異度可達(dá)83％。證實(shí)mir-3150a-5p基因在鼻咽癌患者診斷預(yù)后中具備良好的應(yīng)用前景。另外，發(fā)現(xiàn)敲低mir-3150a-5p會(huì)顯著抑制鼻咽癌細(xì)胞及其分泌的外泌體中mir-3150a-5p的表達(dá)量且能有效抑制鼻咽癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移等惡性進(jìn)展。上述發(fā)現(xiàn)表明mir-3150a-5p對(duì)鼻咽癌的重要性，并提示采用mirna?inhibitor靶向敲低mir-3150a-5p進(jìn)行鼻咽癌治療的可行性。