本發(fā)明屬于疾病診斷與藥物靶點(diǎn)領(lǐng)域，具體涉及nets在子宮內(nèi)膜異位癥診療中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
1、子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis,em)是一種影響全球約10％育齡女性的慢性婦科疾病，其特點(diǎn)是子宮內(nèi)膜樣組織的異位生長(zhǎng)。該病常伴有嚴(yán)重的盆腔疼痛、不孕以及生活質(zhì)量下降。然而，其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，這阻礙了有效的診斷和治療。自1927年sampson提出“經(jīng)血逆流”學(xué)說(shuō)以來(lái)，即脫落的子宮內(nèi)膜細(xì)胞在腹腔內(nèi)種植，已有多種理論相繼出現(xiàn)。這些理論包括血液/淋巴傳播、激素驅(qū)動(dòng)的化生、遺傳易感性和免疫失調(diào)，表明微環(huán)境差異和未明確定的調(diào)節(jié)因子在疾病進(jìn)展中起著關(guān)鍵作用。越來(lái)越多的證據(jù)支持微生物群，尤其是腸道和腹腔菌群，通過(guò)炎癥通路參與子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病和進(jìn)展。
2、腸道菌群是存在于胃腸道中的復(fù)雜微生物群落，調(diào)控全身炎癥和免疫反應(yīng)。菌群失衡(dysbiosis)，即腸道微生物群的失衡，與多種炎癥性和自身免疫性疾病相關(guān)。在子宮內(nèi)膜異位癥中，已有研究報(bào)道腸道菌群組成發(fā)生改變，表現(xiàn)為促炎性特征，如變形菌門(proteobacteria)增加，而厚壁菌門(firmicutes)減少。這些微生物群的變化可能通過(guò)產(chǎn)生促炎性的代謝物和調(diào)節(jié)宿主免疫反應(yīng)，參與子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機(jī)制。腹腔是子宮內(nèi)膜異位癥病變的主要部位。傳統(tǒng)上被認(rèn)為無(wú)菌的，但近期研究表明，與健康對(duì)照組相比，子宮內(nèi)膜異位癥患者的腹腔具有不同的菌群特征。這些特征包括病原菌(如瘤胃球菌屬和銅綠假單胞菌)的增加，以及內(nèi)毒素(如脂多糖，lps)水平的升高。這些菌群變化可能通過(guò)機(jī)制(如lps-tlr4信號(hào)傳導(dǎo))促進(jìn)慢性炎癥，從而可能促進(jìn)異位病變的形成。先前的研究報(bào)告指出，腸道和腹腔液中的菌群共享共同的屬級(jí)分類單元，這些可作為子宮內(nèi)膜異位癥的潛在生物標(biāo)志物，提示腸道-腹腔菌群可能存在交叉對(duì)話。然而，但是，腹腔內(nèi)的菌群因素對(duì)腹腔免疫微環(huán)境的調(diào)控作用并未明確。
3、中性粒細(xì)胞是體內(nèi)免疫細(xì)胞中數(shù)量最多的一類，它們作為第一道防線在免疫反應(yīng)和對(duì)抗感染及損傷中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在子宮內(nèi)膜異位癥中，中性粒細(xì)胞被招募到腹腔，通過(guò)釋放促炎性細(xì)胞因子參與異位病變的形成?；罨闹行粤＜?xì)胞釋放多種生物活性物質(zhì)，如細(xì)胞因子、趨化因子、蛋白水解酶、活性氧和中性粒細(xì)胞外陷阱(nets)。nets由去凝縮的dna和抗菌蛋白組成。nets在先天免疫中發(fā)揮關(guān)鍵作用，例如防止尿路致病菌的上行，因?yàn)樗鼈兡軌蚋咝Р东@病原微生物。然而，nets的過(guò)度產(chǎn)生可能會(huì)加劇組織損傷和炎癥。重要的是，微生物產(chǎn)物(如脂多糖，lps)和失調(diào)的腸道或腹腔菌群可能通過(guò)模式識(shí)別受體(如tlr)激活中性粒細(xì)胞。然而，將微生物觸發(fā)因素與netosis以及子宮內(nèi)膜異位癥病變發(fā)展之間的聯(lián)系及其確切信號(hào)通路仍不清楚。
4、本發(fā)明旨在探討腸道和腹腔菌群在誘導(dǎo)netosis和子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病中的作用。通過(guò)單細(xì)胞rna測(cè)序、功能實(shí)驗(yàn)和小鼠模型，我們旨在闡明免疫細(xì)胞與微生物因素在子宮內(nèi)膜異位癥中的復(fù)雜相互作用。理解這些機(jī)制可能為潛在的治療靶點(diǎn)提供見(jiàn)解，并改善子宮內(nèi)膜異位癥患者的管理策略。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供nets在子宮內(nèi)膜異位癥診療中的應(yīng)用。
2、第一方面，本發(fā)明提供了nets作為生物標(biāo)志物在制備子宮內(nèi)膜異位癥診斷試劑盒中的應(yīng)用。
3、作為一個(gè)優(yōu)選例，所述的nets是指來(lái)自neu_mme亞群釋放產(chǎn)生的。
4、作為另一優(yōu)選例，檢測(cè)的樣品為腹腔積液中聚合物，所述的聚合物由中性粒細(xì)胞、nets和子宮內(nèi)膜細(xì)胞組成。
5、第二方面，本發(fā)明提供了檢測(cè)nets含量的試劑在制備子宮內(nèi)膜異位癥診斷試劑盒中的應(yīng)用。
6、作為一個(gè)優(yōu)選例，所述的nets是指來(lái)自neu_mme亞群釋放產(chǎn)生的。
7、作為另一優(yōu)選例，檢測(cè)的樣品為腹腔積液中聚合物，所述的聚合物由中性粒細(xì)胞、nets和子宮內(nèi)膜細(xì)胞組成。
8、第三方面，本發(fā)明提供了neu_mme亞群在制備評(píng)估netosis發(fā)生程度或子宮內(nèi)膜異位癥嚴(yán)重程度診斷試劑盒中的應(yīng)用。
9、作為一個(gè)優(yōu)選例，所述的neu_mme亞群在人的樣本中檢測(cè)標(biāo)記是cd45+cd11b+cd16b+mme+；在小鼠的樣本中檢測(cè)標(biāo)記是cd45+cd11b+ly6g+mme+。
10、作為一個(gè)優(yōu)選例，所述的neu_mme亞群是以netosis的形式釋放產(chǎn)生nets的來(lái)源細(xì)胞。
11、作為另一優(yōu)選例，所述的netosis發(fā)生程度是指nets生成的水平。
12、作為另一優(yōu)選例，所述的子宮內(nèi)膜異位癥嚴(yán)重程度是指子宮內(nèi)膜異位癥的臨床評(píng)分(rasrm評(píng)分)。
13、第四方面，本發(fā)明提供了netosis抑制劑或dnase?i在制備治療子宮內(nèi)膜異位癥藥物中的應(yīng)用。
14、作為一個(gè)優(yōu)選例，所述的netosis抑制劑是gsk484。
15、作為另一優(yōu)選例，所述的子宮內(nèi)膜異位癥是nets誘導(dǎo)的子宮內(nèi)膜異位癥。
16、作為另一優(yōu)選例，所述的子宮內(nèi)膜異位癥是腹腔細(xì)菌來(lái)源的lps誘導(dǎo)的子宮內(nèi)膜異位癥。
17、本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于：本發(fā)明證實(shí)腹腔內(nèi)的nets通過(guò)捕獲作用促進(jìn)子宮內(nèi)膜細(xì)胞的定植以及遷移和增殖能力，從而促進(jìn)內(nèi)異癥病灶的發(fā)生發(fā)展，并且發(fā)現(xiàn)neu_mme亞群是nets的主要來(lái)源，因此檢測(cè)neu_mme亞群評(píng)估netosis的發(fā)生程度具有重要意義。但是目前評(píng)估netosis的指標(biāo)單一(例如常用的padi4)，我們數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)在netosis的發(fā)生過(guò)程中mme比padi4表達(dá)更早且更加靈敏，因此針對(duì)mme的檢測(cè)評(píng)估netosis的發(fā)生程度具有顯著優(yōu)勢(shì)。
18、另外，基于臨床樣本分析發(fā)現(xiàn)腹腔液的neu_mme亞群與內(nèi)異癥的臨床rasrm評(píng)分密切相關(guān)；小鼠內(nèi)異癥模型分析也發(fā)現(xiàn)，neu_mme亞群與內(nèi)異癥病灶的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。因此，基于neu_mme亞群檢測(cè)用于評(píng)估內(nèi)異癥的嚴(yán)重程度及病灶進(jìn)展具有顯著優(yōu)勢(shì)及應(yīng)用前景。
19、本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，腹腔液中mme+中性粒細(xì)胞(neu_mme)的募集和活化與子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)展有關(guān)。neu_mme釋放的中性粒細(xì)胞胞外陷阱(nets)是由細(xì)菌脂多糖(lps)誘導(dǎo)產(chǎn)生的。nets通過(guò)捕獲子宮內(nèi)膜細(xì)胞并增強(qiáng)其增殖和遷移，從而促進(jìn)子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)展。在小鼠模型中通過(guò)藥物抑制netosis或清除nets，可以顯著抑制子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)展。這些發(fā)現(xiàn)突出了nets在子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病機(jī)制中的關(guān)鍵作用，提示靶向netosis和nets可能提供一種新的治療策略，以阻斷子宮內(nèi)膜異位癥病灶形成過(guò)程中腹腔內(nèi)游離的子宮內(nèi)膜碎片或細(xì)胞粘附定植、增殖和遷移的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，從而減少病灶的發(fā)生及進(jìn)展。
1.nets作為生物標(biāo)志物在制備子宮內(nèi)膜異位癥診斷試劑盒中的應(yīng)用。
2.檢測(cè)nets含量的試劑在制備子宮內(nèi)膜異位癥診斷試劑盒中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的nets是指來(lái)自neu_mme亞群釋放產(chǎn)生的。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于，檢測(cè)的樣品為腹腔積液中聚合物，所述的聚合物由中性粒細(xì)胞、nets和子宮內(nèi)膜細(xì)胞組成。
5.neu_mme亞群在制備評(píng)估netosis發(fā)生程度或子宮內(nèi)膜異位癥嚴(yán)重程度診斷試劑盒中的應(yīng)用。
6.netosis抑制劑或dnase?i在制備治療子宮內(nèi)膜異位癥藥物中的應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的netosis抑制劑是gsk484。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的子宮內(nèi)膜異位癥是netosis釋放nets誘導(dǎo)的子宮內(nèi)膜異位癥。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，子宮內(nèi)膜異位癥是腹腔細(xì)菌來(lái)源的lps誘導(dǎo)netosis誘導(dǎo)的子宮內(nèi)膜異位癥。