中和抗甲型流感病毒抗體及其用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及特異性結(jié)合甲型流感血凝素三聚物的莖區(qū)中的表位并中和組1亞型和組2亞型的甲型流感病毒的抗體或其抗原結(jié)合片段。本發(fā)明還涉及編碼所述抗體或抗體片段的核酸、產(chǎn)生所述抗體或抗體片段的永生化B細胞和培養(yǎng)的單漿細胞以及涉及結(jié)合所述抗體或抗體片段的表位。此外，本發(fā)明涉及所述抗體、抗體片段和表位在篩選方法中以及在甲型流感病毒感染的診斷、治療和預(yù)防中的用途。
【專利說明】中和抗甲型流感病毒抗體及其用途
【背景技術(shù)】
[0001]對甲型流感病毒的中和抗體應(yīng)答對給定病毒亞型通常是特異性的。有16種由它們的血凝素(“HA”)蛋白限定的甲型流感亞型。這16種HA (HI H16)可被分成兩組。組 I 由 H1、H2、H5、H6、H8、H9、H11、H12、H13 和 H16 亞型組成，組 2 包括 H3、H4、H7、H10、H14和H15亞型。雖然所有的亞型均存在于鳥類中，但主要是H1、H2和H3亞型在人中引起疾病。H5、H7和H9亞型正在人中引起散發(fā)性嚴重感染并且可能會產(chǎn)生新的大流行。Hl和H3病毒不斷地進化從而產(chǎn)生新的變體，這種現(xiàn)象被稱為抗原漂移。因此，響應(yīng)以前的病毒而產(chǎn)生的抗體針對新的漂移病毒的保護性差或沒有保護性。結(jié)果是，必須每年產(chǎn)生對抗預(yù)計會出現(xiàn)的Hl和H3病毒的新疫苗，該過程十分昂貴并且也不總是有效。這同樣適用于H5流感疫苗的制備。實際上，還不清楚基于越南或印度尼西亞甲型流感病毒分離株的現(xiàn)有H5疫苗是否將能對抗將來的流行性H5病毒。
[0002]因為這些原因，將非常期望具有可誘導(dǎo)能夠中和所有甲型流感病毒亞型以及它們每年的變體的廣譜中和抗體(Gerhard等人2006年進行了綜述)。此外，廣譜中和異亞型抗體可作為藥物施用來預(yù)防或治療甲型流感感染。對于這類藥物的制造，選擇以高滴度產(chǎn)生以降低生產(chǎn)成本的抗體是重要的。
[0003]已經(jīng)表征了識別甲型流感病毒的抗體。針對M2 (在受感染的細胞上表達但不在感染病毒上表達的一種小蛋白質(zhì))的抗體已經(jīng)顯示出一定的體內(nèi)保護性效果，可能是通過靶向受感染細胞來通過NK細胞或細胞毒性T細胞破壞。還可能用中和抗體靶向HA蛋白。HA作為同型三聚體前提多肽HAO合成。每個單體可獨立地在翻譯后切割而形成兩條多肽即HAl和HA2，通過單個二硫鍵連接。較大的N末端片段(HAl，320-330個氨基酸)形成含有受體結(jié)合位點和大部分被病毒中和抗體識別的決定簇的膜遠端球形結(jié)構(gòu)域。HA的HAl多肽負責(zé)病毒與細胞表面的吸附。較小的C末端部分(HA2，~180個氨基酸)形成將該球形結(jié)構(gòu)域錨定至細胞或病毒膜的莖狀結(jié)構(gòu)。HA2多肽介導(dǎo)病毒和細胞膜在核內(nèi)體中融合，從而釋放核糖核蛋白復(fù)合物釋放進細胞質(zhì)中。
[0004]亞型之間的序列同源性的程度在HAl多肽(亞型之間34% 59%的同源性)比在HA2多肽(51% 80%同源性)中小。最保守的區(qū)域是切割位點周圍的序列，特別是HA2N末端11個氨基酸，稱為融合肽，其在所有甲型流感病毒亞型中是保守的。部分該區(qū)域暴露為HA前體分子(HAO)中的表面環(huán)區(qū)(loop)，但當(dāng)HAO被切割成HA1/HA2時變成不可接近。概括地說，不同HA亞型中，尤其是在HA1-HA2連接區(qū)和在HA2區(qū)中都有保守區(qū)。然而這些區(qū)域?qū)τ谥泻涂贵w可能是不易接近的。
[0005]在鑒別中和不止一種亞型的甲型流感病毒的抗體方面僅取得有限的成功。另外，迄今所鑒別的抗體的中和作用的跡象窄并且其效價低。Okuno等人用甲型流感病毒/0kuda/57 (H2N2)免疫小鼠并分離了單克隆抗體(C179)，該單克隆抗體結(jié)合HA2中的保守構(gòu)象表位并在動物模型中在體`外和體內(nèi)中和組I的H2、H1和H5亞型甲型流感病毒(Okuno等人，1993 ；Smirnov 等人，1999 ；Smirnov 等人，2000)。
[0006]Gioia等人描述了在接受了常規(guī)季節(jié)性流感疫苗的某些個體的血清中存在H5N1病毒中和抗體(Gioia等人，2008)。該作者提出，中和活性可能是由于神經(jīng)氨酸苷酶(NI)的抗體。然而，未分離單克隆抗體并且未表征靶表位。另外，尚未清楚該血清抗體是否中和其他亞型的甲型流感病毒。
[0007]已經(jīng)從免疫供體的記憶B細胞和漿細胞分離了可結(jié)合HA的莖狀區(qū)中的表位并且能夠中和組I或組2中的一些甲型流感病毒亞型的異亞型人抗體。然而，至今尚未發(fā)現(xiàn)靶向在所有16個亞型上保守的HA三聚體中的表位并且能夠中和組I和組2亞型二者的病毒的甲型流感特異性中和抗體，并且它們的分離仍是治療方法和疫苗設(shè)計的主要目標。
[0008]盡管進行了數(shù)十年的研究，但還沒有投入市場的廣譜中和或抑制甲型流感病毒感染或緩解甲型流感病毒引起的疾病的抗體。因而，需要鑒別中和多種亞型的甲型流感病毒并且可作為藥物用于預(yù)防或治療甲型流感感染的新抗體。還需要鑒別以高滴度產(chǎn)生以降低生產(chǎn)成本的抗體。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明部分基于從接種了季節(jié)性流感疫苗的個體分離出可結(jié)合HA并中和不止一種亞型的甲型流感病毒的感染的自然產(chǎn)生的人單克隆抗體以及本發(fā)明抗體結(jié)合的新表位。因此，在本發(fā)明的一個方面，本發(fā)明包括中和選自組I和組2亞型的不止一種亞型的甲型流感病毒的感染的抗體及其抗原結(jié)合片段。
[0010]在本發(fā)明的一個實施例中，本發(fā)明包括中和組I亞型和組2亞型的甲型流感病毒的感染的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段。在本發(fā)明的另一個實施例中，其包括中和組I亞型和組2亞型的甲型流感病毒的感染并且特異性結(jié)合甲型流感血凝素(HA)三聚體的莖區(qū)中的表位的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段的重鏈和輕鏈接觸HA三聚體的第一近端單體中和第二遠端右側(cè)單體中的氨基酸。
[0011]在本發(fā)明的另一個實施例中，本發(fā)明包括中和組I亞型和組2亞型的甲型流感病毒的感染并且特異性結(jié)合甲型流感HA三聚體的莖區(qū)中的表位的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中抗體或其抗原結(jié)合片段的重鏈和輕鏈接觸HA三聚體的第一近端單體中和第二遠端右側(cè)單體中的氨基酸，并且其中該抗體或其抗原結(jié)合片段以比產(chǎn)生FI6變體2的滴度高至少3倍的滴度在被轉(zhuǎn)染的細胞中產(chǎn)生。
[0012]在本發(fā)明的又一個實施例中，本發(fā)明包括中和組I亞型和組2亞型的甲型流感病毒的感染并且特異性結(jié)合甲型流感HA三聚體的莖區(qū)中的表位的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中抗體或其抗原結(jié)合片段的重鏈和輕鏈接觸HA三聚體的第一近端單體中和第二遠端右側(cè)單體中的氨基酸，并且其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含:(i)分別在SEQ IDNO: 1,41和43中示出的或分別在SEQ ID NO: 1,41和42中示出的重鏈CDR1、CDR2和CDR3序列；和(?)分別在SEQ ID N0:4、5和6中示出的或分別在SEQ ID N0:44、5和6中示出的輕鏈⑶Rl、⑶R2和⑶R3序列。
[0013]在本發(fā)明的另一個實施例中，本發(fā)明包括分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含至少一個與SEQ ID NO: 1-6、17-22或41-44中的任一者具有至少95%序列同一性的互補決定區(qū)(CDR)序列，其中該抗體中和甲型流感病毒。
[0014]在本發(fā)明的另 一個實施例中，其包括分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，該分離的抗體或其抗原結(jié)合片段中和組I亞型和組2亞型的甲型流感病毒的感染并且包含:(i)分別在SEQ ID N0:l、41和43中示出的或分別在SEQ ID NO: 1、41和42中示出的重鏈CDR1、CDR2和CDR3序列；和(ii)分別在SEQ ID NO:4、5和6中示出的或分別在SEQ ID N0:44、5和6中示出的輕鏈⑶Rl、⑶R2和⑶R3序列。
[0015]在本發(fā)明的另一個實施例中，本發(fā)明包括分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，該分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含具有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO: 17的氨基酸序列的重鏈CDRl ;具有SEQ ID N0:2、SEQ ID NO: 18或SEQ ID NO:41的氨基酸序列的重鏈CDR2 ;和具有 SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 42 或 SEQ ID N0:43 的氨基酸序列的重鏈 CDR3，其中該抗體中和甲型流感病毒。在本發(fā)明的另一個實施例中，其包括分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，該分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含具有SEQ ID NO:4、SEQ ID NO: 20或SEQ IDNO:44的氨基酸序列的輕鏈CDRl ;具有SEQ ID N0:5或SEQ ID NO:21的氨基酸序列的輕鏈CDR2;和具有SEQ ID N0:6或SEQ ID NO:22的氨基酸序列的輕鏈CDR3，其中該抗體中和甲型流感病毒。
[0016]在本發(fā)明的又一個實施例中，本發(fā)明包括分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體包含具有SEQ ID NO: 13的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和具有SEQ ID NO: 14的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或具有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和具有SEQ ID NO: 14的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或具有SEQ ID NO: 29的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和具有SEQID NO:30的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或具有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和具有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或具有SEQ ID N0:59的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和具有SEQ ID NO:57的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或具有SEQ ID N0:59的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和具有SEQ ID N0:61的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或具有SEQ IDNO:55的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和具有SEQ ID NO:57的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或具有SEQ ID NO:55的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和具有SEQ ID N0:61的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)并且其中該抗體中 和組I亞型和組2亞型的甲型流感病毒。本發(fā)明還包括抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體為FI6變體1、FI6變體2、FI6變體3、FI6變體4或FI6變體5。
[0017]在本發(fā)明的另一個實施例中，本發(fā)明包括中和組I亞型和組2亞型的甲型流感病毒的感染的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其片段由永生化B細胞克隆表達。
[0018]在另一個方面，本發(fā)明包括包含編碼本發(fā)明的抗體或抗體片段的多核苷酸的核酸分子。在又一個方面，本發(fā)明包括包含本發(fā)明的核酸分子的載體和表達本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段的細胞。在另一個實施例中，本發(fā)明包括包含本發(fā)明的載體的細胞。在另一個方面，本發(fā)明包括分離的或純化的免疫原性多肽，該免疫原性多肽包含結(jié)合本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段的表位。
[0019]本發(fā)明還包括藥物組合物，該藥物組合物包含本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段、本發(fā)明的核酸分子、包含本發(fā)明的核酸分子的載體、表達本發(fā)明的抗體或抗體片段的細胞、包含本發(fā)明的載體的細胞、或本發(fā)明的免疫原性多肽以及藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體。本發(fā)明還包括藥物組合物，該藥物組合物包含第一抗體或其抗原結(jié)合片段和第二抗體或其抗原結(jié)合片段，其中第一抗體為本發(fā)明的抗體，而第二抗體為中和甲型流感或乙型流感病毒感染的任何抗體或其抗原結(jié)合片段。
[0020]本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段、本發(fā)明的核酸、包含本發(fā)明的核酸的載體、表達本發(fā)明的載體的細胞、包含結(jié)合本發(fā)明的抗體或抗體片段的表位的分離的或純化的免疫原性多肽、或本發(fā)明的藥物組合物(i)在制備用于治療甲型流感病毒感染的藥物中、(ii)在疫苗中、或(iii)在甲型流感病毒感染的診斷中的用途也設(shè)想處于本發(fā)明的范圍內(nèi)。另外，本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段通過檢查抗甲型流感病毒疫苗的抗原是否含有具有正確構(gòu)象的特異性表位來監(jiān)測所述疫苗的質(zhì)量的用途也設(shè)想處于本發(fā)明的范圍內(nèi)。
[0021]在另一個方面，本發(fā)明提供預(yù)防、治療或減輕甲型流感病毒感染或降低甲型流感病毒感染的風(fēng)險的方法，包括給對其有需要的受試者施用治療有效量的本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合抗體片段。
[0022]在另一個方面，本發(fā)明包括特異性結(jié)合本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段的表位，其(i)用于療法中、(ii)用于制備治療甲型流感病毒感染的藥物、(iii)用作疫苗、或(iv)用于篩選能夠中和甲型流感病毒感染的配體。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0023]圖1示出了已用表達編碼FI6變體2、3、4或5的基因的載體瞬時轉(zhuǎn)染的293F細胞的抗體產(chǎn)生的滴度。
[0024]圖2A和2B是分別與FI6變體3 (在圖中稱為FI6)復(fù)合的HlHA和H3HA的F亞結(jié)構(gòu)域的表面展示。在HAl和HA2中選定的促成保守性疏水溝槽的側(cè)鏈用箭頭指示，其近似邊界用黑線指示。Thr (40)和 Thr (318)位于 HAl 中，而 Ile (45)、Trp (21)、Thr (41)、Leu (38)和18-21轉(zhuǎn)折(turn)位于HA2中。
[0025]圖3示出了 FI6變體3 (在圖中稱為FI6)與HA三聚體的F亞結(jié)構(gòu)域的結(jié)合。圖3A示出了以Ribbons表示法表示的結(jié)合三個FI6變體3抗體的H3HA的三聚體。HA單體之一的HAl為黑色，HA2為深灰色，而其他兩個HA單體為淺灰色。圖3B和3C分別示出了 Hl/FI6變體3復(fù)合物和H3/FI6變體3復(fù)合物中IXDRl環(huán)區(qū)與相鄰HA單體的融合肽的相互作用的縮放視圖。圖3D和3E示出了來自H5HA與CR6261的復(fù)合物(pdb ID 2GBM) (D)和H5HA與FlO的復(fù)合物(pdb 3FKU) (E)的單體的結(jié)構(gòu)，與FI6變體3相比它們結(jié)合類似的區(qū)域但
它們的VH結(jié)構(gòu)域在HA上的位置低5-10人。
[0026]圖4示出了 FI6變體3 (在圖中稱為FI6_v3)與Hl和H3HA的F亞結(jié)構(gòu)域的相互作用。其描繪了 Hl HA和H3 HA的F亞結(jié)構(gòu)域以及具有選定側(cè)鏈的FI6變體3的HCDR3和IXDRl環(huán)區(qū)的表面表示。最接近的HA單體以淺灰色描繪；遠端右側(cè)單體以淺灰色描繪；與H3 HAl的N38結(jié)合的聚糖以深灰色球體描繪。
[0027]圖5示出了交叉反應(yīng)性抗體結(jié)合位點處的組特異性差異。圖5A和5B示出了Asn-38處的碳水化合物側(cè)鏈在H3 HA不含配體的結(jié)構(gòu)(apo_structure) (A)中和在FI6變體3結(jié)合結(jié)構(gòu)⑶中的定位。圖5C和示出了 HAl Trp-21在不同抗體復(fù)合物中的取向。子圖C示出了與Hl或H3HA 的F亞結(jié)構(gòu)域相互作用的FI6變體3(在圖中稱為FI6)的HCDR3環(huán)區(qū)的Phe-1OOD。子圖D示出了分別向H5 HA的Trp-21呈送Phe_55和Phe_54的FlO和CR6261抗體的HCDR2環(huán)區(qū)。
[0028]圖6示出了 FI6變體3在HA上的接觸表面。四個子圖示出了 FI6變體3、CR6261和FlO抗體在HA上的印跡(用黑線描繪輪廓)；三個HA單體以白色、淺灰色或深灰色描繪。圖6A:FI6變體3/未切割Hl的接觸印跡;圖6B:FI6變體3/切割H3 ;圖6C:CR6261/H5 ;圖6D:F10/H5o與CR6261和FlO不同，F(xiàn)I6變體3與兩個HA單體構(gòu)成接觸。對于FI6變體3復(fù)合物，標記了抗體/HA界面處的糖基化位點。
[0029]圖7示出了 FI6變體3VH和VK鏈中接觸HA的殘基(粗體，Kabat編號法)。
[0030]圖8顯示FI6變體3在甲型流感病毒感染的小鼠模型中賦予保護作用。圖8A示出了在以10MLD50 (小鼠中的50%致死劑量)H1N1A/PR/8/34病毒經(jīng)鼻內(nèi)感染前三個小時經(jīng)靜脈內(nèi)(1.v.)接受不同劑量的FI6變體3的BALB/c小鼠(每種實驗條件五只)的存活曲線而圖8B示出了其體重損失。圖8C示出了在以3 X 105pfu的H3N2HK_x31病毒感染前三個小時經(jīng)靜脈內(nèi)接受不同劑量的FI6變體3的小鼠(每種實驗條件十只)的體重損失。所示出的是所進行的三個實驗中的一個代表性實驗。還示出的是在以10MLD50的A/PR/8/34病毒感染后第O天(感染前3小時)或第1、2和3天經(jīng)靜脈內(nèi)接受15mg/kg FI6變體3的小鼠(每種實驗條件五只)的存活曲線(圖8D)和體重損失(圖SE)。示出了所進行的兩個實驗中的一個代表性實驗。所示出的是平均值土SD。圖8F和8G示出了在以A/PR/8/34病毒感染前一天接受 10mg/kg(F)或 3mg/kg(G)的 FI6 變體 2(FI6_v2)、FI6_v2KA (缺少補體結(jié)合)、FI6-V2LALA (缺少補體和FcR結(jié)合)或?qū)φ湛贵w的小鼠(每種實驗條件十只)的存活曲線。
[0031]圖9示出了在HlNl PR/8/34致死攻擊后經(jīng)FI6變體3處理的小鼠的肺病毒滴度。BALB/c小鼠(每種實驗條件四只小鼠)在經(jīng)10MLD50H1N1 PR/8/34鼻內(nèi)(1.η.)感染之前三小時(第O天)或之后第1、2或3天接受靜脈內(nèi)注射15mg/kg FI6變體3或?qū)φ湛贵w(HJ16，HIV-1特異性)。在肺部感染后4天測定病毒滴度。在大腦中，病毒無法偵測。數(shù)據(jù)以箱須圖(box-and-whiskers)形式呈現(xiàn),其中箱從第25百分位延伸至第75百分位，中間為水平線。箱上方和下方的須指示極值。學(xué)生t檢驗統(tǒng)計學(xué)分析的結(jié)果對于p〈0.05而言以*表示，對于p〈0.0Oi而言以***表示。
[0032]圖10示出了與HA莖區(qū)結(jié)合的FI6變體3干擾蛋白酶介導(dǎo)的HAO切割。用FI6變體3、FE17 (識別HA球形頭部上`的Ca2位點的人抗體)或?qū)φ湛贵w溫育來自H1NC/99分離株的重組HA。然后使HA-抗體混合物在37°C下暴露于經(jīng)TPCK處理的胰蛋白酶5、10或20分鐘。然后在變性條件下使樣品在聚丙烯酰胺凝膠上跑膠并使用可識別所有甲型流感菌株的HA2和HAO的生物素化人mAb(F032)來使蛋白質(zhì)印跡顯影。示出的是HAO帶。示出了三個實驗中的一個代表性實驗。
【具體實施方式】
[0033]本發(fā)明部分地基于從接種了季節(jié)性甲型流感疫苗的個體中發(fā)現(xiàn)和分離能廣譜中和不同亞型的甲型流感病毒的天然產(chǎn)生的人抗體以及本發(fā)明抗體所結(jié)合的新型表位。希望得到這樣的抗體，因為為了中和不同亞型的甲型流感病毒僅需要一種或少數(shù)幾種抗體。另外，廣譜中和異亞型抗體以高滴度產(chǎn)生從而降低生產(chǎn)包含抗體的藥物的成本。另外，由這類抗體識別的表位可成為能夠誘導(dǎo)針對不同亞型的季節(jié)性和候選流行分離株的廣譜保護作用的疫苗的一部分。
[0034]因此，在一個方面，本發(fā)明提供分離的抗體和其抗原結(jié)合片段，其能中和至少兩種組I和組2亞型中的甲型流感病毒。在一個實施例中，本發(fā)明提供分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其能中和組I亞型和組2亞型的甲型流感病毒感染。
[0035]在另一個實施例中，提供分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其能中和組I亞型和組2亞型的甲型流感病毒感染并且特異性結(jié)合甲型流感HA三聚體的莖區(qū)中的表位，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段的重鏈和輕鏈接觸HA三聚體的第一近端單體和第二遠端右側(cè)單體中的氨基酸。
[0036]如早前所論述的，HA蛋白作為包含三個相同單體的三聚體前體多肽HAO (同型三聚體)而合成。每個單體可獨立于其他兩個單體被切割，或可能不如此。每個單體經(jīng)翻譯后切割形成兩條多肽，即HAl和HA2，其或者由單個二硫鍵連接。本發(fā)明抗體的重鏈和輕鏈接觸HA三聚體的三個單體中的兩個。本發(fā)明抗體所接觸的單體可以是切割的或未被切割的。為清晰起見并且出于理解附圖中示意性表示的目的，將本發(fā)明抗體所接觸的兩個抗體稱作近端單體和遠端右側(cè)單體。
[0037]如本文所用，術(shù)語“抗原結(jié)合片段”、“片段”和“抗體片段”可互換用來指本發(fā)明抗體的保留抗體的抗原結(jié)合活性的任何片段?？贵w片段的例子包括但不限于單鏈抗體、Fab、Fab’、F(ab' )2、Fv或scFv。此外，本文所用的術(shù)語“抗體”包括抗體和其抗原結(jié)合片段二者。
[0038]如本文所用，“中和抗體”是指一種能中和，即防止、抑制、減小、阻礙或干擾病原體引發(fā)和/或保持宿主內(nèi)感染的能力的抗體。術(shù)語“中和抗體”和“中和…的抗體”在本文中可以互換使用。如本文所述，這些抗體可單獨地或以組合形式，在經(jīng)適當(dāng)配制后用作預(yù)防劑或治療劑，與活性疫苗接種聯(lián)合使用，用作診斷工具或用作生產(chǎn)工具。
[0039]對本領(lǐng)域中已知的與Hl和H5HA共結(jié)晶的組I特異性異亞型抗體的X射線結(jié)晶學(xué)研究表明抗體與HA三聚體的僅一個單體相互作用。另外，研究顯示這些抗體使HA僅與重鏈的CDR殘基接觸而不與輕鏈的CDR殘基接觸。相反，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段并非接觸三個HA單體中的一個，而是接觸兩個。另外，本發(fā)明的抗體使HA與來自重鏈和輕鏈二者的CDR殘基接觸。另外，由本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段與HA構(gòu)成的相互作用的性質(zhì)與由其他抗體(CR6261和F10)構(gòu)成的相互作用性質(zhì)明顯不同。最顯著的區(qū)別在于本發(fā)明抗體與HA上的疏水溝槽的相互作用僅由重鏈的⑶R3 (HCDR3)介導(dǎo)，而對于CR6261和FlO而言，該結(jié)合中涉及所有三個HCDR。
[0040]在一個實施例中，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段的重鏈接觸近端單體中的氨基酸殘基，且本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段的輕鏈接觸HA三聚體的近端單體和遠端右側(cè)單體二者中的氨基酸殘基。本發(fā)明抗體接觸的單體(即，近端單體和遠端右側(cè)單體)可未被切割，或其可被切割而形成HAl和HA2多肽。在一個實施例中，近端單體和遠端右側(cè)單體被切割。在另一個實施例中，近端單體和遠端右側(cè)單體未被切割。
[0041]本發(fā)明的抗體和抗原結(jié)合片段特異性結(jié)合甲型流感病毒的16種亞型的16種不同HA中保守的表位。在一個實施例中，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段結(jié)合包含HAl中位置329處的氨基酸殘基和HA2中位置1、2、3和4處的氨基酸殘基的表位，其中HAl和HA2存在于HA三聚體的未切割單體中。
[0042]在另一個實施例中，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段的重鏈接觸近端或遠端右側(cè)單體的HAl中位置318處的氨基酸殘基和HA2中位置18、19、20、21、38、41、42、45、49、53和57處的氨基酸殘基。這些單體可以是未被切割的或切割的。
[0043]在又一個實施例中，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段的輕鏈接觸未被切割的近端單體的HA2中位置38、39和43處的氨基酸殘基和未被切割的遠端右側(cè)單體的HAl中位置327、328和329處和HA2中位置1、2、3和4處的氨基酸殘基。[0044]在又一個實施例中，本發(fā)明的抗體和抗原結(jié)合片段特異性結(jié)合包含未被切割的近端單體的HAl中位置318處的氨基酸殘基和HA2中位置18、19、20、21、38、39、41、42、43、45、48、49、53、56和57處的氨基酸殘基的表位。另外，這些抗體特異性結(jié)合包含未被切割的遠端右側(cè)單體的HAl中位置327、328、329處的氨基酸殘基和HA2多肽中位置1、2、3和4處的
氨基酸殘基的表位。
[0045]在另一個實施例中，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段的輕鏈接觸近端單體的HA2中位置38、39、42和46處的氨基酸殘基和遠端右側(cè)單體的HAl中位置321和323處和HA2中位置7和11處的氨基酸殘基。在該實施例中，近端和遠端右側(cè)單體二者均被切割。
[0046]在又一個實施例中，本發(fā)明的抗體和抗原結(jié)合片段特異性結(jié)合包含切割的近端單體的HAl中位置318處的氨基酸殘基和HA2中位置18、19、20、21、38、39、41、42、45、46、49、52,53和57處的氨基酸殘基，以及被切割的遠端右側(cè)單體的HAl中位置321和323處的氨基酸殘基和HA2中位置7和11處的氨基酸殘基的表位。
[0047]如本文所示，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段能夠特異性結(jié)合所有16種亞型的甲型流感病毒的HA。在一個實施例中，本發(fā)明的抗體特異性結(jié)合亞型H1、H2、H3、H4、H5、H6、H7、H8、H9、H10、H11、H12、H13、H14、H15 和 H16 的甲型流感 HA。
[0048]在本發(fā)明的另一個實施例中，本發(fā)明提供具有高生產(chǎn)滴度的抗體。舉例而言，一旦分離本發(fā)明的兩種極類似的抗體(FI6變體I和FI6變體2)，就合成所述抗體的若干種變體(尤其是FI6變體2的變體)來改善在轉(zhuǎn)染細胞中的產(chǎn)生。在一個實施例中，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段以比產(chǎn)生FI6變體2的滴度高至少1.5倍的滴度在被轉(zhuǎn)染的細胞中產(chǎn)生。在另一個實施例中，本發(fā)明的抗體以比產(chǎn)生FI6變體2的滴度高至少1.8、2、2.2,2.5,2.7、
3,3.2,3.4,3.6,3.8、4、4.2,4.4,4.6,4.8、5、5.3、5.6 或 6 倍的滴度產(chǎn)生。在一些實施例中，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段以比產(chǎn)生FI6變體2的滴度高至少3倍、至少4倍或至少4.5倍的滴度在被轉(zhuǎn)染的細胞中產(chǎn)生。
[0049]因此，在一個實施例中，本發(fā)明提供一種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中和組I亞型和組2亞型的甲型流感病毒的感染并且特異性結(jié)合甲型流感HA三聚體的莖區(qū)中的表位，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段的重鏈和輕鏈接觸HA三聚體的第一近端單體和第二遠端右側(cè)單體中的氨基酸，且其中該抗體或其抗原結(jié)合片段在轉(zhuǎn)染細胞中以比產(chǎn)生FI6變體2時的滴度高例如至少3倍的滴度產(chǎn)生。
[0050]如本文所述，轉(zhuǎn)染細胞可為本領(lǐng)域技術(shù)人員現(xiàn)在已知或后來發(fā)現(xiàn)用于表達編碼本發(fā)明抗體的核酸序列的任何細胞。這樣的細胞的例子包括但不限于哺乳動物宿主細胞，例如CHO、HEK293T、PER.C6、NS0、骨髓瘤或雜交瘤細胞。此外，這些細胞可被瞬時轉(zhuǎn)染或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染類型以及適用于轉(zhuǎn)染的細胞類型在本領(lǐng)域技術(shù)人員的技能范圍內(nèi)。
[0051]在另一個實施例中，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段特異性結(jié)合包含SEQ IDNO: 37、38、39或40中任一者的氨基酸序列的多肽。
[0052]人單克隆抗體、分泌本發(fā)明抗體的永生化B細胞克隆或轉(zhuǎn)染的宿主細胞以及編碼本發(fā)明抗體的核酸也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。如本文所用，術(shù)語“廣譜特異性”用來指可結(jié)合和/或中和一種或多種組I亞型和一種或多種組2亞型的甲型流感病毒的本發(fā)明抗體或抗原結(jié)合片段。
[0053]本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段中和一種或多種組I亞型(H1、H2、H5、H6、H8、H9、H11、H12、H13和H16以及它們的變體)的甲型流感病毒和一種或多種組2亞型(H3、H4、H7、H10、H14和H15以及它們的變體)的甲型流感病毒。在一個實施例中，示例性的組I亞型包括H1、H2、H5、H6和H9，示例性的組2亞型包括H3和H7。
[0054]本發(fā)明的抗體和抗體片段能夠中和甲型流感病毒亞型的各種組合。在一個實施例中，抗體可中和甲型流感病毒Hl和H3亞型、或H2和H3亞型，或H3和H5亞型，或H3和H9亞型，或Hl和H7亞型，或H2和H7亞型，或H5和H7亞型，或H7和H9亞型。
[0055]在另一個實施例中，本發(fā)明的抗體和抗體片段可中和甲型流感病毒Hl、H2和H3亞型，或Hl、H3和H5亞型，或Hl、H3和H9亞型，或H2、H3和H5亞型，或H2、H3和H9亞型，或H3、H5和H9亞型，或Hl、H2和H7亞型，或Hl、H5和H7亞型，或Hl、H7和H9亞型，或H2、H5和H7亞型，或H2、H7和H9亞型，或H5、H7和H9亞型，或H1、H3和H7亞型，或H2、H3和H7亞型，或H3、H5和H7亞型，或H3、H7和H9亞型。
[0056]在又一個實施例中，抗體可中和甲型流感病毒Hl、H2、H3和H7亞型，或Hl、H3、H5和H7亞型，或H1、H3、H7和H9亞型，或H2、H3、H5和H7亞型，或H2、H3、H7和H9亞型，或H3、H5、H7 和 H9 亞型，或 H1、H2、H3 和 H5 亞型，或 H1、H2、H3 和 H9 亞型，或 H1、H3、H5 和 H9亞型，或H2、H3、H5和H9亞型，或H1、H2、H5和H7亞型，或H1、H2、H7和H9亞型，或H1、H5、H7和H9亞型，或H2、H5、H7和H9亞型。
[0057]在又一實施例中，本發(fā)明的抗體可中和甲型流感病毒Hl、H2、H3、H5和H7亞型，或H1、H2、H3、H7 和 H9 亞型，或 H1、H3、H5、H7 和 H9 亞型，或 H2、H3、H5、H7 和 H9 亞型，或 Hl、H2、H3、H5 和 H9 亞型，或 H1、H2、H5、H7 和 H9 亞型，或 H1、H2、H3、H5、H7 和 H9 亞型。在又
一個實施例中，除了中和甲型流感病毒H6亞型外，本發(fā)明的抗體和抗原結(jié)合片段還中和上述組合中的一者或多者。
`[0058]本發(fā)明的抗體和抗原結(jié)合片段具有高中和效價。中和50%甲型流感病毒所需要的本發(fā)明抗體的濃度可例如為約50 μ g/ml或更低。在一個實施例中，中和50%甲型流感病毒所需要的本發(fā)明抗體的濃度為約 50、45、40、35、30、25、20、17.5、15、12.5、11、10、9、8、7、6、
5,4.5、4、3.5、3、2.5、2、1.5或約I μ g/ml或更低。在另一個實施例中，中和50%甲型流感病毒所需要的本發(fā)明抗體的濃度為約0.9,0.8,0.75,0.7,0.65,0.6,0.55,0.5,0.45,0.4、0.35、0.3、0.25、0.2、0.15、0.1、0.075、0.05、0.04、0.03、0.02,0.0U0.008,0.006,0.004、0.003,0.002或約0.001 μ g/ml或更低。這意味著中和50%甲型流感病毒僅需低濃度的抗體。可使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標準中和測定法來測量特異性和效價。
[0059]本發(fā)明提供對于HA具有特定廣譜特異性且中和一種或多種組I的甲型流感病毒亞型和一種或多種組2的甲型流感病毒亞型的抗體。本發(fā)明的抗體結(jié)合HA的在選自組I和組2的兩種或更多種甲型流感病毒亞型之間保守的區(qū)域中的表位。
[0060]在一個實施例中，本發(fā)明提供抗體，例如分離的抗體或純化的抗體，其特異性地結(jié)合組I和組2甲型流感病毒亞型的HA的莖區(qū)中的保守表位并且干擾病毒的復(fù)制和傳播。本發(fā)明還提供抗體，例如分離的抗體或純化的抗體，其特異性地結(jié)合組I和組2亞型的HA的莖區(qū)中的保守表位并抑制病毒進入細胞。不受任何理論約束，在一個示例性實施例中，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段結(jié)合甲型流感病毒的莖區(qū)中的保守表位并通過干擾融合步驟來抑制病毒進入細胞。在一個實施例中，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段通過募集補體和表達FcR的殺傷細胞并介導(dǎo)抗體依賴細胞毒性(antibody-dependent cellcytotoxicity, ADCC)來限制病毒傳播。蛋白的表位或抗原決定簇對應(yīng)于該分子為抗體的結(jié)合位點(或互補位)所特異性識別的那些部分。因此，表位是需要互補性互補位來進行它們的操作性識別的相關(guān)實體。在蛋白的不同變體之間保守的表位是指相同的互補位能通過接觸這些分子的相同部分而特異性地識別這些不同的變體。
[0061]本發(fā)明的抗體可以是單克隆的，例如人單克隆抗體，或重組抗體。本發(fā)明還提供本發(fā)明抗體的片段，尤其是保留抗體的抗原結(jié)合活性的片段。盡管本說明書(包括權(quán)利要求書)在某些地方，明確是指抗體的抗原結(jié)合片段、抗體片段、變體和/或衍生物，但是應(yīng)當(dāng)理解，術(shù)語“抗體”或“本發(fā)明的抗體”包括所有的抗體類別，即抗體的抗原結(jié)合片段、抗體片段、變體和衍生物。
[0062]在一個實施例中，本發(fā)明的抗體和抗體片段中和組I和組2的兩種或更多種甲型流感病毒亞型的組合。示例性甲型流感病毒亞型包括但不限于H5N1 (A/越南/1203/04)、HlNl (A/新喀里多尼亞/20/99)、HlNl (A/所羅門群島/3/2006)、H3N2 (A/懷俄明/3/03)和H9N2 (A/雞/香港/G9/97)。在另一個實施例中，抗體中和3、4、5、6、7或更多種組I和組2甲型流感病毒亞型的組合和/或?qū)?、4、5、6、7或更多種組I和組2甲型流感病毒亞型的組合具特異性。
[0063]在一個示例性實施例中，本發(fā)明包括對甲型流感病毒亞型Hl和H3 (例如HlNl和H3N2)或H1、H3、H5和H9 (例如H1N1、H3N2、H5N1和H9N2)具特異性的抗體或其抗體片段。在又一個實施例中，抗體或其抗體片段對犯、!13、冊、!17和H9 (例如H1N1、H3N2、H5N1、H7N1、H7N7、H9N2)具特異性。在本 申請的前面部分提供了甲型流感病毒亞型的其他示例性組合。
[0064]本發(fā)明的示例性抗體的重鏈可變區(qū)(VH)和輕鏈可變區(qū)(VL)的氨基酸序列的SEQID編號以及編碼它們的核酸序列的SEQ ID編號列于表1中。
[0065]表1:示例性甲型流感病毒中和抗體的W多肽和多核苷酸的SEQ ID編號
【權(quán)利要求】
1.一種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中和組I亞型和組2亞型的甲型流感病毒的感染并特異性結(jié)合甲型流感血凝素(HA)三聚體的莖區(qū)中的表位，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段的重鏈和輕鏈接觸所述HA三聚體的第一近端單體和第二遠端右側(cè)單體中的氨基酸，并且其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段以比產(chǎn)生FI6變體2的滴度高至少3倍的滴度在被轉(zhuǎn)染的細胞中產(chǎn)生。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段的重鏈接觸所述近端單體中的氨基酸殘基，并且其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段的輕鏈接觸所述近端單體中的氨基酸殘基和所述HA三聚體的所述遠端右側(cè)單體中的氨基酸殘基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異性結(jié)合甲型流感HA三聚體的莖區(qū)中的表位，并且其中所述HA三聚體中的所述第一或第二單體是未被切割的或切割的。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段的重鏈接觸所述第一或第二單體的HAl中位置318處的氨基酸和HA2中位置18、19、20、21、38、41、42、45、49、53和57處的氨基酸殘基，并且其中所述單體是未被切割的或被切割的。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段的輕鏈接觸所述近端單體的HA2中位置38、39和43處的氨基酸殘基和所述遠端右側(cè)單體的HAl中位置327、328和329以及HA2中位置1、2、3和4處的氨基酸殘基，并且其中所述近端單體和所述遠端右側(cè)單體是未被切割的。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段的輕鏈接觸所述近端單體的HA2中位置38、39、42和46處的氨基酸殘基以及所述遠端右側(cè)單體的HAl中位置321和323以及HA2中位置7和11處的氨基酸殘基，并且其中所述近端單體和所述遠端右側(cè)單體是被切割的。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述 的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異性結(jié)合包含所述近端單體的HAl 中位置 318 處的氨基酸和 HA2 中位置 18、19、20、21、38、39、41、42、43、45、48、49、53、56和57處的氨基酸殘基，以及所述遠端右側(cè)單體的HAl中位置327、328、329處的氨基酸殘基和HA2多肽位置1、2、3和4處的氨基酸殘基的表位，其中所述近端單體和所述遠端右側(cè)單體是未被切割的。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異性結(jié)合包含所述近端單體的HAl 中位置 318 處的氨基酸和 HA2 中位置 18、19、20、21、38、39、41、42、45、46、49、52、53 和 57處的氨基酸殘基，以及所述遠端右側(cè)單體的HAl中位置321和323處的氨基酸殘基和HA2中位置7和11處的氨基酸殘基的表位，其中所述近端單體和所述遠端右側(cè)單體是被切割的。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異性結(jié)合包含HAl中位置329處的氨基酸和HA2中位置1、2、3和4處的氨基酸殘基的表位，其中所述HAl和HA2存在于所述HA三聚體的未被切割的單體中。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段特異性結(jié)合亞型 H1、H2、H3、H4、H5、H6、H7、H8、H9、H10、H11、H12、H13、H14、H15 和 H16 的甲型流感HA。
11.一種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中和組I亞型和組2亞型的甲型流感病毒的感染并且特異性結(jié)合甲型流感HA三聚體的莖區(qū)中的表位，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段的重鏈和輕鏈接觸所述HA三聚體的第一近端單體和第二遠端右側(cè)單體中的氨基酸，并且其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含:(i)分別在SEQ ID N0:l、41和43中示出的或分別在SEQ ID NO: 1,41和42中示出的重鏈CDRU CDR2和CDR3序列；和(ii)分別在SEQID N0:4、5和6中示出的或分別在SEQ ID NO:44,5和6中示出的輕鏈CDRU CDR2和CDR3序列。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段的重鏈接觸所述近端單體中的氨基酸殘基，并且其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段的輕鏈接觸所述HA三聚體的所述近端單體中和所述遠端右側(cè)單體中的氨基酸殘基。
13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異性結(jié)合甲型流感HA三聚體的莖區(qū)中的表位，并且其中所述HA三聚體中的所述第一或第二單體是未被切割的或切割的。
14.根據(jù)權(quán)利要求11所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段的重鏈接觸所述第一或第二單體的HAl中位置318處的氨基酸和HA2中位置18、19、20、21、38、41、42、45、49、53和57處的氨基酸殘基，并且其中所述單體是未被切割的或切割的。
15.根據(jù)權(quán)利要求11所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段的輕鏈接觸所述近端單體的HA2中位置38、39和43處的氨基酸殘基和所述遠端右側(cè)單體的HAl中位置327、328和329以及HA2中位置1、2、3和4處的氨基酸殘基，并且其中所述近端單體和所述遠端右側(cè)單體是未被切割的。
16.根據(jù)權(quán)利要求11所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段的輕鏈接觸所 述近端單體的HA2中位置38、39、42和46處的氨基酸殘基和所述遠端右側(cè)單體的HAl中位置321和323以及HA2中位置7和11處的氨基酸殘基，并且其中所述近端單體和所述遠端右側(cè)單體是被切割的。
17.根據(jù)權(quán)利要求11所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異性結(jié)合包含所述近端單體的 HAl 中位置 318 處的氨基酸和 HA2 中位置 18、19、20、21、38、39、41、42、43、45、48、49、53、56和57處的氨基酸殘基，以及所述遠端右側(cè)單體的HAl中位置327、328、329處的氨基酸殘基和HA2多肽中位置1、2、3和4處的氨基酸殘基的表位，其中所述近端單體和所述遠端右側(cè)單體是未被切割的。
18.根據(jù)權(quán)利要求11所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異性結(jié)合包含所述近端單體的 HAl 中位置 318 處的氨基酸和 HA2 中位置 18、19、20、21、38、39、41、42、45、46、49、52、53和57處的氨基酸殘基，以及所述遠端右側(cè)單體的HAl中位置321和323處的氨基酸殘基和HA2中位置7和11處的氨基酸殘基的表位，其中所述近端單體和所述遠端右側(cè)單體是被切割的。
19.根據(jù)權(quán)利要求11所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異性結(jié)合包含HAl中位置329處的氨基酸和HA2的位置1、2、3和4處的氨基酸殘基的表位，其中所述HAl和HA2存在于所述HA三聚體的未被切割的單體中。
20.根據(jù)權(quán)利要求11所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段特異性結(jié)合亞型 H1、H2、H3、H4、H5、H6、H7、H8、H9、H10、H11、H12、H13、H14、H15 和 H16 的甲型流感HA。
21.一種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中和組I亞型和組2亞型的甲型流感病毒的感染，并且包含:(i)分別在SEQ ID NO: 1、41和43中示出的或分別在SEQ ID N0:l、41和42中示出的重鏈⑶R1XDR2和⑶R3序列；和(ii)分別在SEQ ID NO:4、5和6中示出的或分別在SEQ ID N0:44、5和6中示出的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3序列。
22.根據(jù)權(quán)利要求1-21中任一項所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含與SEQIDN0:59或55中示出的氨基酸序列具有至少80%序列同一性的重鏈可變區(qū)；和與SEQ IDNO: 57或61中不出的氨基酸序列具有至少80%序列同一性的輕鏈可變區(qū)；
23.一種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含具有SEQ ID NO:59的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和具有SEQ ID NO:57的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或具有SEQ ID NO: 59的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和具有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或具有SEQ ID NO:55的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和具有SEQ ID NO:57的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；或具有SEQID NO:55的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和具有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)，并且其中所述抗體中和組I亞型和組2亞型的甲型流感病毒。
24.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體為人抗體、單克隆抗體、純化的抗體、單鏈抗體、Fab> Fab’、F(ah' ) 2、Fv或scFv。
25.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其用于治療甲型流感病毒感染。
26.一種核酸分子，其包含編碼前述權(quán)利要求中任一項所述的抗體或其抗原結(jié)合片段的多核苷酸。
27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的核酸分子，其中所述多核苷酸包含與SEQID NO:45-54,56、58、60或62中任一者中所不的核酸序列具有至少75%同一性的序列。
28.根據(jù)權(quán)利要求26所述的核酸分子，其中所述多核苷酸包含SEQID N0:60和58、或SEQ ID NO:60 和 62、或 ·SEQ ID NO:56 和 58、或 SEQ ID NO:56 和 62 中所示的序列。
29.—種載體，其包含根據(jù)權(quán)利要求26、27或28所述的核酸分子。
30.一種細胞，其表達根據(jù)權(quán)利要求1-25中任一項所述的抗體或其抗原結(jié)合片段；或者包含根據(jù)權(quán)利要求29所述的載體。
31.一種分離的或純化的免疫原性多肽，其包含結(jié)合根據(jù)權(quán)利要求1-25中任一項所述的抗體或其抗原結(jié)合片段的表位。
32.—種藥物組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求1-25中任一項所述的抗體或其抗原結(jié)合片段、根據(jù)權(quán)利要求26-28中任一項所述的核酸、根據(jù)權(quán)利要求29所述的載體、根據(jù)權(quán)利要求30所述的細胞或根據(jù)權(quán)利要求31所述的免疫原性多肽以及藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體。
33.根據(jù)權(quán)利要求1-25中任一項所述的抗體或其抗原結(jié)合片段、根據(jù)權(quán)利要求26-28中任一項所述的核酸、根據(jù)權(quán)利要求29所述的載體、根據(jù)權(quán)利要求30所述的細胞或根據(jù)權(quán)利要求31所述的免疫原性多肽或根據(jù)權(quán)利要求32所述的藥物組合物的用途，(i)用于制造用來治療甲型流感病毒感染的藥物、(ii)用于疫苗或(iii)用于診斷甲型流感病毒感染。
34.根據(jù)權(quán)利要求1-25中任一項所述的抗體或其抗原結(jié)合片段的用途，用于通過檢查抗甲型流感病毒疫苗的抗原是否含有具有正確構(gòu)象的特異性表位來監(jiān)測所述疫苗的質(zhì)量。
35.一種減少甲型流感病毒感染或降低甲型流感病毒感染的風(fēng)險的方法，包括:給對其有需要的受試者施用預(yù)防或治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求1-25中任一項所述的抗體或其抗原結(jié)合片段。
【文檔編號】C07K16/10GK103717617SQ201180072356
【公開日】2014年4月9日 申請日期:2011年7月18日 優(yōu)先權(quán)日:2011年7月18日
【發(fā)明者】A·蘭扎韋基亞 申請人:生物醫(yī)學(xué)學(xué)會