本發(fā)明涉及一種鼠傷寒沙門菌特異性抗原片段及其在檢測鼠傷寒沙門菌抗體中的應用，屬于鼠傷寒沙門菌特異性抗原片段領域。

背景技術：

1、沙門菌是重要的人獸共患病原菌，可廣泛感染多種動物，還能夠通過肉類、雞蛋、牛奶等食品傳染給人類，引起胃腸炎等疾病甚至死亡，公共衛(wèi)生意義重大。沙門菌血清型有2600多種，其中鼠傷寒沙門菌是引起食源性疾病最常見的沙門菌血清型之一。在過去的數十年里，鼠傷寒沙門菌在動物性食品和腹瀉病人監(jiān)測中的檢出率迅速上升，是一種廣泛宿主的沙門菌血清型，已成為引起全球動物和人感染的最常見沙門菌血清型之一。直接影響畜禽養(yǎng)殖業(yè)的生產力，造成巨大經濟損失，同時也是公共衛(wèi)生的重大威脅。因此建立有效預防和檢測鼠傷寒沙門菌的方法具有重要的經濟和社會意義。

2、目前檢測鼠傷寒沙門菌的方法大多為傳統(tǒng)分離方法和分子生物學技術如pcr方法等。前者耗時久，操作復雜，且需要經血清型鑒定才可確定是否為鼠傷寒沙門菌，無法實現快速檢測。后者檢測時間短，但需要專業(yè)人員和專門設備，對人員操作和設備要求較高，很難在基層推廣使用。而針對沙門菌感染檢測的免疫學技術—elisa方法具有成本低、操作簡單且靈敏度高和特異性強等優(yōu)點，尤其適合畜禽養(yǎng)殖企業(yè)等的大批量樣品高通量檢測。

3、沙門菌鞭毛蛋白中含有不同的h抗原，分為一相(flic)和二相(fljb)。其中一相(flic)是特異性抗原，沙門菌鞭毛蛋白的特異性抗原表位是血清型分型的基礎之一。從鞭毛蛋白的結構域角度來看，鞭毛蛋白由d0、d1、d2和d3四個結構域組成。其中d0和d1結構域高度保守，d2和d3結構域不僅決定了不同沙門菌的血清型也是決定鞭毛蛋白的免疫原性的關鍵區(qū)域，d3結構域還位于鞭毛蛋白表面，具有高度可變性。目前，有關鼠傷寒沙門菌特異性抗原片段用于建立鼠傷寒沙門菌的elisa免疫學檢測方法未見報道。

技術實現思路

1、發(fā)明目的：本發(fā)明所要解決的技術問題是提供了一種鼠傷寒沙門菌特異性抗原片段及其在檢測鼠傷寒沙門菌抗體中的應用，目的在于以鼠傷寒沙門菌特異性抗原片段為包被抗原制備鼠傷寒沙門菌間接elisa抗體檢測試劑盒，用于解決現有的針對檢測鼠傷寒沙門菌耗時長，靈敏度和特異性低的問題。

2、技術方案：為解決上述技術問題，本發(fā)明提供一種鼠傷寒沙門菌特異性抗原片段p1，其氨基酸序列如seq?id?no.1所示：aldnstfkasatglggtdqkidgdlkfddt?tgkyyakvtvtggtgkdgyyevsvdktngevtlaggatspltgglpatatedvkn?v。

3、其中，所述鼠傷寒沙門菌特異性抗原片段的制備方法如下：

4、對鼠傷寒沙門菌鞭毛蛋白flic進行b細胞表位預測，篩選出特異性強、免疫原性高的基因片段，進行截短表達，將seq?id?no.1送至生工生物公司進行質粒構建；然后將質粒轉化到表達菌株中，誘導表達、純化，得到鼠傷寒沙門菌特異性抗原片段。

5、本發(fā)明還提供一種編碼所述鼠傷寒沙門菌特異性抗原片段的基因。

6、其中，所述基因的核苷酸序列如seq?id?no.2所示。

7、本發(fā)明還提供所述鼠傷寒沙門菌特異性抗原片段或其基因在制備檢測鼠傷寒沙門菌抗體的試劑或試劑盒中的應用。

8、本發(fā)明還提供一種試劑或試劑盒，其含有所述鼠傷寒沙門菌特異性抗原片段。

9、其中，包括間接elisa試劑盒。

10、其中，所述鼠傷寒沙門菌特異性抗原片段的濃度為0.125～3μg/ml。

11、其中，還含有酶標二抗、陰性對照血清、陽性對照血清、tmb顯色液和終止液。

12、其中，所述酶標二抗為hrp-兔抗雞igg抗體。

13、本發(fā)明還提供所述鼠傷寒沙門菌特異性抗原片段或試劑或試劑盒在非診斷目的的檢測鼠傷寒沙門菌抗體中的應用。

14、其中，包括以下步驟：

15、(1)包被：將鼠傷寒沙門菌特異性抗原片段的溶液進行包被；

16、(2)封閉：利用封閉液進行封閉；

17、(3)加一抗：加入用封閉液稀釋后的待測血清，孵育；

18、(4)加酶標二抗：加入稀釋后的酶標二抗，孵育；

19、(5)底物顯色：加入tmb顯色液，避光作用；

20、(6)加終止液：加入終止液后立即測定od450值；

21、(7)判定：當od450值≥0.56時判定為陽性，表明血清中存在鼠傷寒沙門菌抗體；od450值≤0.47時，可判定為陰性，表明血清中不存在鼠傷寒沙門菌抗體；0.56≥od450值≥0.47時，樣品判定為可疑。

22、其中，步驟(1)中所述鼠傷寒沙門菌特異性抗原片段的濃度為0.125～3μg/ml。

23、優(yōu)選地，步驟(1)中所述鼠傷寒沙門菌特異性抗原片段的濃度為0.25～3μg/ml。

24、優(yōu)選地，步驟(1)中所述鼠傷寒沙門菌特異性抗原片段的濃度為0.5～3μg/ml。

25、優(yōu)選地，步驟(1)中所述鼠傷寒沙門菌特異性抗原片段的濃度為1～3μg/ml。

26、優(yōu)選地，步驟(1)中所述鼠傷寒沙門菌特異性抗原片段的濃度為2～3μg/ml。

27、其中，步驟(1)中所述包被的條件為4～37℃、1～16h。

28、優(yōu)選地，步驟(1)中所述包被的條件為4℃、12～16h。

29、優(yōu)選地，步驟(1)中所述包被的條件為4℃、14～16h。

30、其中，步驟(2)中所述封閉液包括1～5％?bsa或1～5％脫脂牛奶。

31、優(yōu)選地，步驟(2)中所述封閉液包括1～5％?bsa或1～2％脫脂牛奶。

32、優(yōu)選地，步驟(2)中所述封閉液包括1～5％?bsa或1％脫脂牛奶。

33、優(yōu)選地，步驟(2)中所述封閉液包括1～2％?bsa。

34、其中，步驟(2)中所述封閉的時間為1～3h。

35、其中，步驟(3)中所述待測血清的稀釋度為1：50～6400。

36、優(yōu)選地，步驟(3)中所述待測血清的稀釋度為1：50～800。

37、優(yōu)選地，步驟(3)中所述待測血清的稀釋度為1：50～400。

38、其中，步驟(3)中所述孵育的時間為0.5～2.5h。

39、優(yōu)選地，步驟(3)中所述孵育的時間為1～2.5h。

40、優(yōu)選地，步驟(3)中所述孵育的時間為1.5～2.5h。

41、優(yōu)選地，步驟(3)中所述孵育的時間為2～2.5h。

42、其中，步驟(4)中所述酶標二抗的稀釋度為1:1000～10000。

43、優(yōu)選地，步驟(4)中所述酶標二抗的稀釋度為1:2000～5000。

44、優(yōu)選地，步驟(4)中所述酶標二抗的稀釋度為1:4000～5000。

45、其中，步驟(4)中所述孵育的時間為30～75min。

46、其中，步驟(5)中所述避光作用的時間為6～18min。

47、優(yōu)選地，步驟(5)中所述避光作用的時間為8～18min。

48、優(yōu)選地，步驟(5)中所述避光作用的時間為10～18min。

49、優(yōu)選地，步驟(5)中所述避光作用的時間為15～18min。

50、優(yōu)選地，所述包被抗原以0.05m碳酸氫鹽(ph9.6)作為包被液，鼠傷寒沙門菌特異性抗原片段的包被濃度為3μg/ml。

51、本發(fā)明還提供所述檢測試劑盒在鼠傷寒沙門菌的流行病學調查中的應用。

52、本發(fā)明基于沙門菌鞭毛蛋白一相d2和d3結構域的特異性和高度可變性并結合生物信息學技術，篩選到一段可用于檢測鼠傷寒沙門菌的特異性抗原表位，并通過大腸桿菌原核系統(tǒng)進行表達。旨在建立一種鼠傷寒沙門菌特異的免疫學檢測方法，為鼠傷寒沙門菌的檢測和防控奠定基礎。

53、有益效果：與現有技術相比，本發(fā)明具有如下顯著優(yōu)點：1、本發(fā)明首次公開了以鼠傷寒沙門菌特異性抗原片段作為間接elisa的包被抗原，建立了鼠傷寒沙門菌間接elisa抗體檢測方法，鼠傷寒沙門菌特異性抗原片段含有鼠傷寒沙門菌flic蛋白的優(yōu)勢b細胞表位，能夠特異性識別誘導產生的鼠傷寒沙門菌flic蛋白抗體，在提高抗原抗體特異性結合方面有顯著性的增效作用；2、本發(fā)明能夠用于鼠傷寒沙門菌抗體的檢測，為鼠傷寒沙門菌的流行病學調查以及沙門菌的防控提供了有力的技術支持；3、本發(fā)明所述的間接elisa方法靈敏度高、特異性強、高通量，并簡化了檢測步驟，縮短了檢測時長；4、通過對間接elisa檢測方法的各個步驟進行嚴格篩選，本檢測方法能夠檢測雞血清中的鼠傷寒沙門菌抗體，本方法再次前未見報道，說明本發(fā)明所建立的檢測方法填補了雞源鼠傷寒沙門菌檢測的空白，可見本方法能夠有效預防雞源沙門菌的傳播與流行，起到重要的社會和經濟意義。