本發(fā)明涉及發(fā)酵，尤其是涉及一種具有香蕉香味的釀酒酵母培養(yǎng)物及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、香蕉香氣是非常宜人的受消費者喜歡的香氣之一。在公知領(lǐng)域中，產(chǎn)香特定香氣的酵母所占酵母種群的豐度很小，而其中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)具有產(chǎn)香蕉香氣的酵母菌株數(shù)量是更加稀少。已被公知的產(chǎn)香蕉香氣的產(chǎn)香酵母，一般能夠產(chǎn)生具有香蕉風(fēng)格的香氣，但是這種香氣并不單一和純凈，在產(chǎn)生香蕉香氣的同時往往還伴有其他類型香氣，使得這種香氣對于真實的香蕉香氣仿真度并不高。其次，具有功效性的酵母占酵母種群的豐度很小，目前已經(jīng)知道的具有優(yōu)良護膚功效的酵母發(fā)酵產(chǎn)物或濾液，其氣味往往不宜人。

2、現(xiàn)有技術(shù)具有功效的酵母菌株發(fā)酵生產(chǎn)的酵母發(fā)酵產(chǎn)物濾液產(chǎn)品氣味主要為口水味、黃酒氣味、醬油味等不愉快發(fā)酵氣味，這主要是由于這些具有功效的酵母，在發(fā)酵過程中同時產(chǎn)生的其他發(fā)酵產(chǎn)物所帶來的發(fā)酵氣味。例如，sk-ii神仙水中的主體成分半乳糖酵母樣菌發(fā)酵產(chǎn)物濾液具有特征的發(fā)酵氣味和微酸味，這些氣味被許多消費者形容為口水味。這些氣味在日化產(chǎn)品應(yīng)用中不受是消費者與化妝品開發(fā)人員的歡迎。針對上述問題，絕大多數(shù)廠商通過添加香精賦香的方式掩蓋異味，但無法從根本上解決發(fā)酵異味，異味通常依然殘留于產(chǎn)品的底味中，在香氣散去后余留皮膚表面導(dǎo)致不好的使用體驗和有限的使用范圍。

3、目前，已知和已經(jīng)商用的報道的產(chǎn)香蕉香氣的酵母主要源于清酒和德國白啤酒。其中，日本島根縣奧出云町的出產(chǎn)的完熟香蕉酵母純米吟釀酒就以其香蕉香氣而知名，而特征是在米香的基礎(chǔ)上，含有濃郁的香蕉香氣，這種香氣來自于其所使用的清酒酵母7#。德國的白啤酒(或被稱為hefeweizen啤酒)也是以啤酒中豐富的果香而知名，其中含有香蕉香氣是其重要特征之一，德國白啤酒中的香蕉香氣，主要產(chǎn)自其所使用的特殊的白啤酒酵母，形成了特色的德國或比利時的白啤酒酵母體系。但是無論是清酒還是德國hefeweizen啤酒，香蕉香氣是產(chǎn)香酵母菌所產(chǎn)生混合香氣的其中一種特征香氣，但并不是唯一單一香氣，其往往還帶有其他特征香氣，最終呈現(xiàn)出一種帶有香蕉香氣風(fēng)格的混合香氣。例如，完熟香蕉酵母純米吟釀酒中的香蕉香氣并不是僅有香蕉香氣，同時還具有米酒香和酒香。而德國白啤酒酵母中除了產(chǎn)生香蕉氣味以外，還具有酒香、丁香、水果香的混合香氣，香蕉香氣僅僅是其呈現(xiàn)的氣味中的一種，而不是單一的香蕉香氣。現(xiàn)有已知的公開領(lǐng)域中，尚未有能夠主要呈現(xiàn)香蕉香氣或者單一呈現(xiàn)香蕉香氣的生香酵母的報道。第二，香蕉香氣的產(chǎn)生與已知的產(chǎn)香酵母的培養(yǎng)條件具有較高的相關(guān)性，香蕉風(fēng)格香氣緊在較窄的培養(yǎng)方式和產(chǎn)香條件下產(chǎn)生，例如德國白啤酒的產(chǎn)香酵母lalbrew?abbayetm，在較低溫發(fā)酵(17-20℃)下進(jìn)行發(fā)酵時主要產(chǎn)生了濃郁的水果香氣和葡萄干、棗和無花果的味道，而在高溫條件(22-25℃)下發(fā)酵所才產(chǎn)生典型白啤酒口味香氣包括熱帶水果香氣，香料味和香蕉味。

4、具有優(yōu)異功效的酵母菌株在自然界中的比例是極低的，同時具有產(chǎn)香功能的酵母菌株在所有酵母菌株中的比例也是極低，現(xiàn)有技術(shù)中尚未報道一種既具有優(yōu)異功效，同時還具有產(chǎn)香能力的酵母菌株。有鑒于此，本發(fā)明旨在通過提供一種新的菌種，通過發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)一種酵母培養(yǎng)物，使其具有天然的香蕉香氣，并同時具備護膚品的功效。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供一種具有香蕉香味的釀酒酵母培養(yǎng)物及其制備方法和應(yīng)用，該酵母培養(yǎng)物能夠產(chǎn)生較為純粹的香蕉香氣，同時該酵母培養(yǎng)物的產(chǎn)物具有多種生物活性與護膚功效。

2、為達(dá)到上述目的，本發(fā)明一方面提供一種具有香蕉香氣的釀酒酵母培養(yǎng)物的制備方法，包括下列步驟：

3、s1:單菌落平板制備：對釀酒酵母進(jìn)行活化培養(yǎng)，得到釀酒酵母單菌落平板；

4、s2:搖瓶種子培養(yǎng)：將釀酒酵母單菌落平板接種至ypd液體培養(yǎng)基中擴大培養(yǎng)，得到搖瓶種子培養(yǎng)液；

5、s3:有氧發(fā)酵：將搖瓶種子培養(yǎng)液接種至發(fā)酵罐中，采用分階段控制溶氧進(jìn)行有氧發(fā)酵，得到釀酒酵母培養(yǎng)物；

6、步驟s3中，將獲得的搖瓶種子培養(yǎng)液以體積百分?jǐn)?shù)為5％的接種量接種至發(fā)酵罐的發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行擴繁；

7、步驟s3中，分階段控制溶氧包括至少兩階段控制溶氧培養(yǎng)：第一階段控制溶氧培養(yǎng)：od在0-10之間時，通氣量為0.2-1.8vvm，固定轉(zhuǎn)速150rpm；第二階段控制溶氧培養(yǎng)：od＞10時，通氣量0.2-1.2vvm，固定轉(zhuǎn)速150rpm。

8、根據(jù)本技術(shù)的實施例，釀酒酵母為釀酒酵母菌l9(saccharomyces?cerevisiae)，釀酒酵母菌l9保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為：cctcc?no:m2024741，保藏日期為2024年4月22日。其拼接序列為：

9、ggggggtctctactgattgaggtcaactttaagacattgttcgcctagacgctctcttcttatcgataacgttccaatacgctcagtataaaaaagattagccgcagttggtaaaacctaaaacgaccgtacttgcattatacctcaagcacgcagagaaacctctctttggaaaaaaaaacatccaatgaaaaggccagcaatttcaagttaactccaaagagtatcactcactaccaaacagaatgtttgaaaaggaaatgacgctcaaacaggcatgccccctggaataccaaggggcgcaatgtgcgttcaaagattcgatgattcacggaattctgcaattcacattacgtatcgcatttcgctgcgttcttcatcgatgcgagaaccaagagatccgttgttgaaagtttttaatattttaaaatttccagttacaaaaattcttgtttttgacaaaaatttaatgaataaataaaattgtttgtgtttgttacctctgggccccgattgctcgaatgcccaaagaaaaagttgcaaagatatgaaaactccacagtgtgttgtattgaaacggttttaattgtcctataacaaaagcacagaaatctctcaccgtttggaatagcaagaaagaaacttacaagcctagcaagaccgcgcacttaagcgcaggcccggctggactctccatctcttgtcttcttgcccagtaaaagctctcatgctcttgccaaaacaaaaaaatccattttcaaaattattaaatttctttaatgatccttccgcaggttcacctacggaaaccttgttacgactttttacttcc。

10、根據(jù)本技術(shù)的實施例，步驟s1具體包括以下步驟：

11、s11：將高山奶酪樣品分散于無菌生理鹽水中，并進(jìn)行梯度10倍稀釋，將稀釋液涂布到y(tǒng)pd固體培養(yǎng)基上，30℃培養(yǎng)36h，從分離獲得的單菌落中選取的第l板第9個類似酵母菌典型特征的菌落即為釀酒酵母菌l9，置于-80℃保存；

12、s12:-80℃取出釀酒酵母菌l9甘油管,在超凈臺中用無菌接種針取適量甘油菌液在平板培養(yǎng)基上采用多邊形劃線法，接種于ypd液體培養(yǎng)基中，30℃培養(yǎng)36h，平板培養(yǎng)基上形成菌苔后，放置4℃冰箱備用。

13、根據(jù)本技術(shù)的實施例，步驟s2具體包括以下步驟：取兩標(biāo)準(zhǔn)環(huán)菌落，接種至ypd搖瓶種子培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件為220r/min、30℃恒溫培養(yǎng)18h，得到搖瓶種子培養(yǎng)液。

14、根據(jù)本技術(shù)的實施例，ypd液體培養(yǎng)基按照重量百分比計算，包括蛋白胨20份，葡萄糖20份，酵母粉10份。

15、根據(jù)本技術(shù)的實施例，步驟s3有氧發(fā)酵的條件為控制發(fā)酵過程的ph為5.5，發(fā)酵溫度為30-34℃。

16、根據(jù)本技術(shù)的實施例，發(fā)酵培養(yǎng)基包括葡萄糖、蔗糖、酵母蛋白胨、胰蛋白胨、酵母粉、生物素、葉酸和水。

17、根據(jù)本技術(shù)的實施例，在步驟s3之后還包括對釀酒酵母培養(yǎng)物進(jìn)行離心和過濾的步驟，以得到作為釀酒酵母發(fā)酵產(chǎn)物的濾液。

18、另一方面，本技術(shù)提供了一種采用如上所述的制備方法制備所得的香蕉香味釀酒酵母培養(yǎng)物。

19、再一方面，本技術(shù)公開了如上所述的香蕉香味釀酒酵母培養(yǎng)物在護膚品中的應(yīng)用。

20、本發(fā)明技術(shù)方案相對于現(xiàn)有技術(shù)的有益效果是：

21、(1)本技術(shù)采用的釀酒酵母是從瑞士阿爾比斯山高山奶酪中分離出的能夠產(chǎn)生果蕉香氣且具有美白功效的釀酒酵母，將其命名為釀酒酵母(saccharomyces?cerevisiae)l9菌株，該菌種具有良好的發(fā)酵力、產(chǎn)酯能力，低起泡性，制得發(fā)酵產(chǎn)物胞濾物果蕉香氣濃郁、具有促細(xì)胞增殖與遷移，促修護功效，降低炎癥因子及減少皮膚色素沉著已經(jīng)提高皮膚含水的護膚功效。

22、(2)本發(fā)明在常規(guī)培養(yǎng)基中添加增香菌株釀酒酵母l9，均可產(chǎn)生香蕉香香氣濃郁的發(fā)酵液，工藝簡單、生產(chǎn)效率高、生產(chǎn)成本低、天然健康、適合工業(yè)化。

23、(3)本發(fā)明經(jīng)試驗優(yōu)化了發(fā)酵溫度，在發(fā)酵過程采用分階段控制溶氧，可促進(jìn)香蕉香氣的合成，使果蕉香更加濃郁，提高生產(chǎn)效率，同時也帶有酒香、酸香和甜香，香氣強度適中且豐富。

24、(4)本發(fā)明制備的具有香蕉香氣的酵母發(fā)酵培養(yǎng)物具有促細(xì)胞增殖與遷移，促修護功效，降低炎癥因子及減少皮膚色素沉著以及提高皮膚含水量的護膚功效。